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【第五届原创】UPLC检测人参中7种皂苷成分

液相色谱(LC)

  • 一、实验目的及原理:
    参照药典中人参皂苷的检测,使用超高效液相色谱,对于人参中7种皂苷成分进行检测,大大提高了检测速度,并拓展了检测的皂苷种类。人参中的皂苷成分通过超声波萃取,高校液相色谱柱进行分离,采用紫外检测器进行检测,外标法定量。
    二、实验仪器及试剂:
    仪器:UPLC(waters H-Class),检测器:TUV紫外检测器、超声波仪、超纯水机、离心机、涡旋振荡仪、50ml离心管、20ml胖肚移液管
    试剂:人参皂苷标准品Rb1、Rb2、Rd、Re、Rf、Rg1购自食品药品检定院, 人参皂苷标准品Rc购自百灵威、乙腈(HPLC)、甲醇(HPLC)
    三、色谱条件:
    色谱柱:BEHC18 2.1mm×50 mm×1.7um 柱温:35℃ 样品温度:25℃
    进样体积:5µL 流速:0.4ml/min 波长:203nm 采样速率:20点/秒
    流动相配比:

    时间

    乙腈

    曲线类型

    0

    82

    18

    /

    10

    82

    18

    6

    18

    50

    50

    6

    18.1

    82

    18

    6

    20

    82

    18

    6



    四、实验步骤
    4.1、标准储备溶液配制:称取人参皂苷标准品,用甲醇溶解定容,具体见下表:

    4.2、样品处理


    称取样品约0.4g(精确到0.0001g)于50ml离心管中,加入20.0ml超纯水,涡旋15s,超声波萃取30min,5000转/min离心5min,过0.22um水膜,待测。

    五、计算

    5.1样品中人参皂苷浓度的计算:
    X=C*100/m
    式中:X——样品中人参皂苷的浓度(mg/g)
    m——样品称量(g)
    C——待测溶液中人参皂苷的浓度(ug/mL)

    六、标准曲线与线性相关系数


    取标准储备溶液混合,用水稀释至约5、10、20、50、100ug/ml,进行2次平行测定,得到相应的峰面积平均值。以浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,结果如下:



    七、样品测定及回收率实验(以6年红参体为样本)


    八、对照与样品测定的色谱图



    九、结果与讨论
    本实验尝试多个色谱条件, Re、Rg1组分性质非常接近较难分离,选择梯度洗脱的方式加快其他组分的分离,相对于传统液相方法需要至少一个小时的进样时间,UPLC的分离时间在20min,具有较大的优势。
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  • nphfm2009

    第1楼2012/10/24

    应助达人

    不错的原创

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  • yuduoling

    第3楼2012/10/25

    样品是野生人参还是种植人参?

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  • xcf13

    第4楼2012/10/30

    我做过人参、白参、高丽参,都是很ok的

    yuduoling(yuduoling) 发表:样品是野生人参还是种植人参?

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  • yangxuefang

    第5楼2012/11/10

    不错,可是并不是人人都有机会用到啊。

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  • yinslab

    第7楼2019/04/18

    1260液相色谱也可以测试7种人生皂苷,C18柱250*4.6 5um就可以,流动相可以用0.1%磷酸和乙腈,也可以水和乙腈,柱子为安捷伦150mm柱 3um,效果都是可以的,要走梯度,时间有点长,大约60-70分钟。干扰小。

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