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第五届原创高效液相色谱法测定健胃丸中橙皮苷的含量

wangshirf

2012/10/31

私聊

液相色谱（LC）

摘要：目的建立健胃丸中橙皮苷的含量测定方法。方法液相色谱法。色谱柱：Kromasil C₁₈柱（4.6mm×250mm，5µm）；流动相：甲醇-0.5%冰醋酸溶液（35：65）；流速1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长：280nm。结果：橙皮苷在0.2403～1.1214μg 范围内呈线性关系（r=0.9998,n=5），平均加样回收率为99.24 % RSD为0.35 % （n=6）。结论该方法操作简便，结果可靠，可用于健胃丸中橙皮苷的含量测定。

关键词：高效液相色谱法；健胃丸；橙皮苷。

健胃丸主要有陈皮、山楂、神曲B6等成分组成的复方制剂，用于消化不良和饮食阻滞等辅助治疗。为了有效控制健胃丸的质量，经过资料检索^[1～6]以及反复实验探索，本文运用高效液相色谱法对其中主要成分橙皮苷进行了定性定量的研究，建立了健胃丸的含量测定的高效液相色谱法。样品处理简单，结果理想，可以作为健胃丸质量控制方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-M20A检测器， LCsolution色谱工作站， Metteler AB265S（0.01mg）；Sartorius BS124S（0.1mg）

1.2 试药 橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110721-201014）；甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为纯化水。健胃丸（医药制剂自制，批号：20120531、 20120624、20120705 ，规格为0.3g）

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件与图谱

色谱柱: Kromasil C₁₈柱（4.6mmx250mm，5um）；检测波长：283nm；流速：1.0ml.min^-1；流动相：甲醇-0.5%冰醋酸（35：65）；柱温：40℃。

橙皮苷在14min左右出峰，阴性无干扰。图谱如下：

2.2 溶液制备

2.2.1对照品溶液

精密称取橙皮苷对照品6.74mg，置于50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取6ml置50ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

2.2.2供试品溶液

取本品内容物混匀，，取约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声50分钟使溶解，放冷，再称定重量，，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。

2.3 线性关系考察

精密量取对照品储备液5、10、15、20、25μl，按上述色谱条件，记录色谱图，测定峰面积。以橙皮苷面积为纵坐标，橙皮苷进样量为横坐标（ug），得回归方程：Y=184537.97X+4155.6，相关系数 r=0.9998（n=5） ,结果表明橙皮苷在0.2403～1.1214μgμg 范围内呈线性关系。

2.4 精密度试验

取供试品溶液5μl，连续进样5次，记录色谱图，计算峰面积。峰面积分别为293782.9、294994.6、290618.3、293677.6、294659.4，平均面积为293487.5，RSD%=0.6%

2.5 稳定性试验

取供试品溶液，在0、0.5、1、2、4、6、8、12h分别进样测试，记录色谱图。结果供试品溶液在12小时内稳定性良好，峰面积的RSD为0.43%。

2.6 回收试验

取同一批健胃丸（批号：200120531），内容物混匀，约取0.17g6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入对照品储备液， 照含量测定项下的方法制备，加入甲醇，称定重量，超声60分钟使溶解，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。按上述色谱条件进样测定，用回归方程计算回收率，。

表1 回收率试验结果

0.1764 1.9070 1.97 3.87 99.64

0.1752 1.8940 1.97 3.88 100.81

0.1758 1.9005 1.97 3.90 101.50

0.1766 1.9091 1.97 3.84 98.01

0.1769 1.9123 1.97 3.85 98.35
0.1754 1.8962 1.97 3.86 99.86

2.7 样品含量测定

取本品，研细混匀，取约0.17g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声5分钟使溶解，放冷，再称定重量，，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。

表2 样品分析结果

批号含量/（mg/片） RSD/％

20120531 1.442 0.26

20120624 1.451 0.28

20120705 1.485 0.61

3 讨论

参考文献选择甲醇-醋酸-水^[3]，乙腈-水—磷酸^[4]，乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节PH值为3.0）（35：65）^[2]系统进行考察；通过对图谱峰型，保留时间，分离度，溶剂PH等综合分析，最终以甲醇-0.5%冰醋酸溶液（35：65）最优，作为流动相。不同产地陈皮药材中橙皮苷含量各不相同，为了保证中药配方成品质量的均一性、稳定性及临床疗效，必须从源头控制药材质量，制定药材入选标准，根据测定结果，选择质优药材入药，才能保证成药的质量。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中国药典2005年版一部~~.北京：化学工业出版社，2005：458~~

[2]孙冬梅，毕晓黎，胥爱丽等HPLC测定不同产地陈皮药材中橙皮苷的含量[J]. 中国实验方剂学杂志，2009，15（11）：1-3

[3] 华捷 HPLC法测定小儿百部止咳糖浆中橙皮苷和黄芩苷的含量 [J] . 海峡药学 2009，21（6）：83-84

[4] 唐晓如，王小平 .陈皮口腔崩解片中橙皮苷的含量测定[J]. 中国现代中药 2008，10（11）：20-21

[5]董邵君，甑丽萍.高效液相色谱法测定小儿吐泻宁中橙皮苷的含量 [J]. 中国中医药科技2010，17，（2）：149

[6]任锦文，李镜友，张小兵等保和颗粒质量标准的研究 [J]。中医药导报2008，14（1）60-62

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