Waters 1525/2707/2489 分析时的疑问和出现的故障

ZYC：

一、拖尾现象指的是主成分还是杂质成分？

二、如果是主成分，查看报告中的塔板数，如果较低，说明这根柱子柱效太低，尝试换柱子重新分析。如果塔板数较理想，可能是其它方面原因。

三、配制流动相特别是要调PH值，尽可能用PH计调节，以确保PH值达到要求。

四、柱前有没有在线过滤器，如果有要检查滤芯有没有脏，如果脏更换新的。

五、以上是在原方法不变的情况下，找仪器本身原因，方法虽不可置疑，但每个实验室还是要做方法适用性实验。盐酸雷尼替丁可能有离子化趋向，所以方法中使用缓冲盐及PH要求，所以方法调整过程流速和柱温不是主要方向，流动相是主要方向。

六、梯度洗脱可能尝试去改，你没说出各个出峰顺序和保留时间，从方法上看，梯度可分为四个部分，分别斜坡上升、平行、斜坡下降、平行，前两步应该是分析的关键，是否所有的峰都是在两个阶段出峰，后两个阶段应该是让流动相回复到初始状态，以便下一针分析。

七、其它问题暂时没有时间帮你分析，你也可写详细的发我邮箱。

拖尾多是色谱柱的原因，建议你不要改变药典中的梯度方法，因为你调整了梯度，你需要做验证。按照药典中推荐的色谱柱去做，问题应该不大。实在没有的话去查一查药典推荐的色谱柱的键合方式，需要注意的一点是药典中推荐的是填料为5um的色谱柱，你可以尝试一下相同粒径的C18色谱柱去做一下。

峰面积法测试，不需要拖尾因子一定要在0.95-1.05，只有用峰高法测试时才这样规定。峰面积法的话1.6都不是很大的问题。
压力变成24psi的原因应该是，刚刚将流动相换成纯的乙腈，由于乙腈与水容易产生气泡故怀疑是流路中有气泡导致的，用注射器抽一下就好了。
在开启电源的时候不开灯需要在软件上设置，就是不知道你用的是Breeze还是Empower

一、是主峰拖尾。几乎没有特别强的杂质峰。

二、理论塔板数是6300多，已经达到了药典要求。

三、配制流动相也是使用的pH计，应该是符合要求的。

四、没有在线过滤器，只有在线真空脱气机。（没有过滤器，没有预柱，没有保护柱，这样真的很伤害色谱柱，但是主管没有意识到这个，个人觉得这边的色谱柱都是乱用的，甚至主管经常用完不冲洗，所以色谱柱几乎都是半残废的那种。经常有柱子彻底报废。

五、由于盐酸雷尼替丁杂质Ⅰ价格在10000以上，所以公司不打算做系统适用性试验，不知道这符不符合药典的要求（这个品种从未做过）。流动相组分方面应该是不适合改吧？只能调节比例了，把流动相B中的乙腈比例加大？

六、老师说的很对，主要还是在前两个步骤出峰，在5min多的时候隐约有个杂质峰，在原梯度程序中15min多的时候有主峰出现。后面的步骤是为了过渡到初始状态。

请问如果不做系统适用性实验（验证），是不是说就算用这种方法测出了含量也是不可信呢？是不符合药典规定的呢？

我已经在找资料了，但现在还没找到……

谢谢您的耐心解答！

一、不知峰面积法的拖尾因子有无规定呢？

二、因为含有盐的流动相，冲柱时先将流动相调为乙腈：水（28:80），冲一段时间之后再缓慢过渡成100%乙腈，但是还是产生气泡了，压力变成24psi，流路无液体流出。说明泵进空气之后是不抽液的。但是用注射器抽的时候需要注意什么吗？泵要不要关掉呢？还有排气阀要关闭吗？

三、用的是Empower3工作站。没看到有设置项。

再次谢谢您的帮助！

不做系统适用性肯定是不符合GMP的。泵进空气抽不出液体，开泵，打开排液阀，将注射器连接在排液阀出口缓慢抽就好了。用Empower3工作站的话设置一个冲洗色谱柱的仪器方法，在检测器那里不要勾选Lamp on就好了。

做系统适用性不是做验证，而是每次做试验时都必须要首先做的，当然你若做一些预实验之类的，你可以忽略。但正式的放行测试之类的必须要做。验证指的是定量限、检测限、线性、重复性、准确度等试验，一般来说新开发一个方法必须要做这些事情，比如你大幅度的改变药典中规定的梯度模式。