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HPLC测定注射用帕米膦酸二钠中的亚磷酸含量

tangtang

2012/11/27
《分析化学》

液相色谱（LC）

这是很久以前做的一个方法，拿来参加原创大赛，支持液相色谱版。

由于涉及公司产品，文中部分信息隐去，请见谅。

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HPLC测定注射用帕米膦酸二钠中的亚磷酸含量

注射用帕米膦酸二钠的原料帕米膦酸二钠结构稳定，对光、热等均不敏感，正常的储存条件下不易产生降解产物。亚磷酸作为帕米膦酸二钠的合成原料，属于制剂中的有关物质。我们参考相关资料，对注射用帕米膦酸二钠中的亚磷酸含量测定进行了研究。

测定法：

“取本品，加水制成每1ml中含帕米膦酸二钠10mg的溶液，摇匀，滤过，作为供试品溶液；另取亚磷酸适量，精密称定，加水制成每1ml中约含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法测定，用阴离子色谱柱；以**溶液为流动相，示差检测器检测；柱温为35℃，流速为1.0ml/min。取对照品溶液和供试品溶液各50μl注入液相色谱仪，供试品溶液的色谱图中如出现与对照品溶液相应的杂质峰，其峰面积不得大于对照品溶液主峰面积（0.5％）”

仪器与试药：

LC-10A液相色谱仪配示差检测器，亚磷酸对照品购自SIGMA。

线性：

取亚磷酸对照品0.1020g，加水溶解并稀释至100ml，分别精密量取1，2，3，4，5ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，制备成约含亚磷酸10，20，30，40，50mg/L的标准曲线序列，依法测定：

浓度mg/L
峰面积
10.20
7991
20.40
15597
30.60
24074
40.80
33525
51.00
42447

以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线：

结果在亚磷酸浓度为10.20～51.00mg/L的范围内，线性关系良好（r＝0.9992）。

进样重复性：

取51.00mg/L的亚磷酸对照品溶液，重复进样6次：

序号
1
2
3
4
5
6
RSD
保留时间
10.979
10.984
10.976
10.978
10.977
10.979
0.1％
峰面积
42687
42777
42772
42541
42497
42322
0.5％

专属性：

1、分别取帕米膦酸二钠对照品、磷酸、亚磷酸各约5mg，置同一100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，依法测定。

结果：帕米膦酸二钠峰保留时间约6.56分钟，磷酸峰保留时间约为8.94分钟，亚磷酸峰保留时间约10.97分钟，分离度为4.68和3.49，显示三者分离良好。

2、取注射用帕米膦酸二钠适量，分成两份，一份加水制成每1ml中含帕米膦酸二钠10mg的溶液。作为供试品溶液，依法测定；另一份加亚磷酸对照品溶液，制成每1ml中含帕米膦酸二钠10mg和含亚磷酸0.05mg的溶液，作为供试品加标溶液，依法测定。

结果：供试品溶液色谱图中，在亚磷酸峰保留时间一致的位置上呈现一色谱峰；在供试品加标溶液色谱图中，该与亚磷酸峰保留时间一致的色谱峰的峰面积明显增加，所增加的峰面积与加入的亚磷酸对照品溶液应呈现的峰面积一致。由此判定，供试品溶液色谱图中所呈现的与亚磷酸峰保留时间一致的杂质峰为供试品溶液中亚磷酸的峰。该亚磷酸峰与相邻色谱峰的分离度大于2.5，显示分离良好，有利于测定。

检测限：

以信噪比约为3:1时的浓度为检测限，经测定，供试品的最低检测限≤0.02％。

耐用性：

文献中采用Metrom IC Anion Super-Scp 100mm×4.6mm和Mitsubishi Kasai MCI Gel SCA 04 Polymer Anion 的色谱柱，流动相为5mmol/L的甲酸溶液，用NaOH溶液调节pH至3.5。因条件所限，我们用的是某品牌色谱柱1和另一品牌的色谱柱2，因柱容量、柱效、分离效果等方面存在差异，无法按文献的方法重现实验的结果，表明该方法对色谱柱有较强的选择性。

离子交换色谱中影响分离效果的主要因素是色谱柱填料特性以及流动相的离子强度和pH。经研究，采用某品牌的色谱柱1，文中所列流动相，亚磷酸峰保留时间适中，与其他色谱峰分离良好。

样品测定：

18批样品测定结果亚磷酸含量在0.1～0.2%之间。

分
该帖子已被版主-三人行加5积分，加2经验;加分理由:原创加分

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yuduoling

第1楼2012/11/27

tangtang老师货很多啊

0

happy美丽

第2楼2012/11/28

18批样品，那得多久才能出结果

0

tangtang

第3楼2012/11/28

十几分钟一针，每批进一针而已，一天就解决了。
happy美丽(dyann) 发表:18批样品，那得多久才能出结果

0

happy美丽

第4楼2012/11/28

对照品那部分就要很长时间的？
tangtang(tangtang) 发表:十几分钟一针，每批进一针而已，一天就解决了。

0

tangtang

第5楼2012/11/28

美丽指做对照品做线性的哪些？那是分开做的，方法做好以后，样品集中到一天来做。
happy美丽(dyann) 发表:对照品那部分就要很长时间的？

0

happy美丽

第6楼2012/11/28

总之蛮麻烦的，我们都是直接样品过来了处理一下直接进样，操作规程里面居然木有其他要求
tangtang(tangtang) 发表:美丽指做对照品做线性的哪些？那是分开做的，方法做好以后，样品集中到一天来做。

0

tangtang

第7楼2012/11/28

产品检验都是按标准来的，我们测的这个项目是因为没有现成的标准，所以要自己建立方法。
happy美丽(dyann) 发表:总之蛮麻烦的，我们都是直接样品过来了处理一下直接进样，操作规程里面居然木有其他要求

0

happy美丽

第8楼2012/11/28

我们也是自己建立的方法
tangtang(tangtang) 发表:产品检验都是按标准来的，我们测的这个项目是因为没有现成的标准，所以要自己建立方法。

0

tangtang

第9楼2012/11/28

方法要经过验证，美丽把过程写出来，关键数据保密，就是很好的原创了。
happy美丽(dyann) 发表:我们也是自己建立的方法

0

happy美丽

第10楼2012/11/28

不能的哦~

我们的产品国内生产的不是很多，而且很多技术都是自主开发，同行们虎视眈眈着呢~

我要写出来一点点，被同行看到可能会触类旁通联想到很多其他方面的内容的哦
tangtang(tangtang) 发表:方法要经过验证，美丽把过程写出来，关键数据保密，就是很好的原创了。

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