“感恩节”系列讲座【第三期】基于博纳艾杰尔制备填料和CHEETAH仪器建立的纯化平台 讲义及问题汇总！【版友协助整理】

在线讲座提问及答案

【有奖问答一】纯化分离常用的色谱柱有哪几种

答：按仪器耐压分：中压制备Flash柱，高压制备柱（钢柱），玻璃柱

按液相分离模式分：正相：hilic，silica，手性，氨基柱，氰基柱，二醇基反相：Venusil XBP C18，Venusil XBP C18（2），Venusil XBP C18（L) Venusil MP， Venusil ASB C18， Venusil HILIC， Promosil C18， Durashell RP， Durashell C18， Innoval C18

【有奖问答二】纯化HPLC与分析HPLC的区别是什么

答：分析HPLC是一种研究样品组成的方法，纯化HPLC是一种可得到产品的手段。

分析HPLC

目的：着重样品组成信息，通常研究样品中大部分或全部组分

进样量仅够检测即可

反相HPLC较为方便

柱内径1~5mm

色谱柱填料粒径小

泵流速小

为最大灵敏度选择检测条件

样品是否溶解于流动相通常不重要

流动相的挥发性不重要

纯化HPLC

目的：纯品的回收，通常只对一种或几种组分干兴趣

尽可能加大进样量以得到更多的产品

正相HPLC较为方便

柱内径一般大于10mm

色谱柱填料粒径较分析型大

泵流速大于10ml/min

适当降低灵敏度选择检测条件

样品溶解度非常重要

流动相应是容易去除的，通常选用可挥发的

【有奖问答三】分离纯化的一般步骤是什么？

答：样品预处理--提取---分离---精制纯化---浓缩



【有奖问答四】CHEETAH 中压快速纯化一体机的优点有哪些？

答：速度快：从溶剂注入到产品收集，整个过程全部自动化，纯化步骤被大大缩短。

成本低：无论是仪器本身成本还是后期使用成本都远低于高压制备液相。

制备量大：可以实现从毫克级到百克级及更大量样品制备的需要。

使用简单：人性化的软件设计，易于操作。

分离度高：使用线性梯度洗脱，获得高的分离度

安全可靠



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以上为讲座“有奖问答”环节提问及答案



【Q1】博纳艾杰尔纯化平台覆盖生物、制药、化学、医学、环境、生命科学等领域吗？

答：是的，包括：植物提取，中药单体制备；化学药/抗生素等药物的高纯；生物类样品：核酸，多肽，蛋白、抗体，病毒等纯化；液晶，光刻胶等高分子产品纯化；化学合成中中间体、产物的制备。

【Q2】CHEETAH仪器建立的纯化平台的步骤是怎么样的？

答：1、了解样品信息，确立实验目的2、样品分析：在Agela分析柱（反相Venusil XBP C18(2)、Venusil MP C18，正相Venusil XBP silica，亲水Venusil hilic等等）上建立分析条件，确定目标峰。3、放大纯化：根据目标峰与左右峰之间分离情况，及上样量要求，选择合适规格HPLC制备柱或中压FLASH柱，放大至CHEETAH HP100高压制备或CHEETAH FS9200中压制备。也可两者结合：先中压去除大部分目标组分以外的组分，然后高压纯化出纯馏分。4、中试及放大生产。目前实验室配有5kg色谱柱，流速可达1L/min的制备型液相，技术人员将全程跟踪，提供技术服务。

【Q3】博纳艾杰尔的亲水色谱柱有哪几种？

答：常用的亲水色谱柱有Venusil MP 、Venusil ASB、Venusil hilic

【Q4】博纳艾杰尔制备填料有哪几种,特点有哪些？

答：天津博纳艾杰尔开发的独特的硅胶表面处理工艺有效地降低了硅胶的酸性，提高了色谱填料的品质，其产品技术已达到国内领先、国际先进水平，并且性价比高，替代进口的优势明显。我们还可以按客户要求定制产品或开发应用方法，真正的人性化的体现，并坚信完善的服务是我们最高的追求，也因此，我们拥有日益增强的市场竞争力和逐步稳固的行业地位。多种填料规格，质量从克级至公斤级，用于制备色谱。填料类型有如下几种，使用寿命长、重现性好

1、Venusil 系列制备型色谱填料包括C18、C8、硅胶、HLP、hilic等色谱填料，这一系列填料在选择性、稳定性、通用性方面均能表现出卓越的性能

2、Innoval系列是一款高性价比的色谱填料。它适合于非极性积极性物质，包括酸、碱、中性及碱性物质的分离。

3、Durashell系列色谱填料有较宽的pH使用范围（1.0-12.0）

4、正相手性制备填料：CA、CO、CJ

5、氧化铝（中性/酸性/碱性）
6、离子交换树脂

每一个系列都含有多种不同键合相制备色谱填料，每种制备填料又包含不同的粒径孔径规格，可根据具体样品来选择合适的色谱填料。

【Q5】请介绍下CHEETAH快速纯化系统?

答：我们的CHEETAH快速纯化系统采用工业一体化设计，实时在线监控，仪器操作简单实用。

外观上12.1寸超大触摸屏控制，操作更加方便。

即时“峰-管”位置对应

防腐蚀台面设计，适用于多种溶剂

方便可拆卸式设计。维护性强。

二元梯度，组多可进行四元切换。

检测器采用独特的光路和液路设计，降低噪音，有效避免气泡对检测器干扰。波长可编程，实现化合物多波长检测。

简单实用的柱支架设计。适用于多种规格的FLASH柱和玻璃柱。

绝对是一款理想的高性价比的快速纯化系统。

【Q6】CHEETAH仪器能直接检测固体样品吗？

答：CHEETAH是可以实现直接固体上样的

后续提问：请问是通过什么原理怎样来分析的？

答：CHEETAH固体上样其实也是液相的原理，只是一种进样方式。对于较难溶的样品，在首个FLASH柱前端可以串联一支上样柱，固体样品与填料拌匀混合在上样柱里面，开泵后流动相直接将样品溶解带入色谱柱中，进而分离。

【Q7】Flash色谱柱柱管是什么材质的，可以反复使用吗？

答：外壳运用聚丙烯、聚四氟材料，Claricep手拧系列FLASH柱，是可以反复拆装使用的。

【Q8】CHEETAH HP 100 高压纯化一体机能够可液体直接注射上样和可固体上样吗？

答：仪器配有有六通进样阀，能够直接注射上样；因为纯化一体机一般连接HPLC制备柱，固体上样对柱损伤较大，不建议使用固体上样。

【Q9】博纳艾杰尔纯化平台在食品检测应用领域广泛吗？

答：目前在制药和化工领域应用较广泛，食品行业也有所涉及，暂时还不算广泛。我们有较擅长这一方面的专家，以后有机会会给大家讲解的，敬请期待吧！

【Q10】CHEETAH仪器直接检测固体样品需要什么样的前处理呢？

答：粉末状固体，可直接与填料拌匀后装上样柱，如果样品是块状固体，可以研细后再拌料装柱。为使样品与填料充分混合均匀，还可以先将样品和填料在有机试剂中搅匀后，旋干试剂装柱。填料应与所用FLASH柱填料相符，一般是样品的2-4倍为宜

【Q11】Flash色谱柱就是常说的快速色谱柱，也是中低压色谱柱吗？贵公司的这款产品优势是什么呢？

答：我们的纯化Flash柱适用于中压制备，运用独特的装填技术对预装柱进行装填，在保证柱效的同时也保证了实验的重现性，柱管采用聚丙烯，保证对各类溶剂的兼容性，产品具有耐压高（180psi）、柱效好、耐腐蚀等优点。标准接头，与其他厂家的仪器具有良好的兼容性。我们现在推出一款手拧柱，耐压更可高达200psi，而且不用工具只靠手拧就可以达到很好的密封效果，半透明的柱管设计可以让您更直观的看到柱内液体的流动，接口除了有标准接口，还有一种带有luer锁结构的，可以实现更好的密封性。常规柱子和手拧柱都可以串联使用，提高分离效果。柱子不光外观设计重要，最重要的还是填料！我们独家工艺键合的填料，为您提供多种而全面的选择。填料粒径范围有20um，20-45um，50um，40-60um等。正相分离的填料有硅胶，CN(氰基），Amide，反相填料有C4、C8、C18、Phenyl柱（苯基），我们的氨基柱正反相溶剂皆可，但是水的比例不能大于30%。一般作为正相柱使用，还有HILIC以及AQ C18可以用于100%水相，多种键合相的填料，给您更多的选择。

【Q12】CHEETAH 100 快速纯化制备色谱（CHEETAH）支持固体及液体上样，那么它的分析化学原理是什么呢？——重复提问，已删除

【Q13】贵公司整套纯化产品一共由几部分组成呢？分别是哪些？

答：其一：整套纯化仪器产品包含哪些

答案：仪器分两种，如果是一体化的制备色谱仪器，你买一套的配置基本涵盖：梯度泵、检测器、馏分收集器、控制系统，色谱柱支架/上样系统，控制系统；如果是分体模块的，其实就是上面哪些配置你自己根据自己需要选择，没有规定说整套一定要包含那些。举个简单例子，高效的人群，一般很少买收集器，因为人力资源成本便宜，但是没有收集器也是一套纯化系统，也可以做纯化。

其二：整套纯化相关产品：

这个答案就非常广泛，应该要从分析——仪器——耗材全套包含，如果是中压制备，做正相，应该要包含：TLC板、flash柱、点样毛细管、上样管/注射器等

【Q14】FLEXA 模块化快速纯化系统流速可扩展吗？

答：200mL/min 1L/min两种最大流速可供选择，不支持扩展但购买时可以选配

【Q15】博纳艾杰尔的产品与其他产品相比，优越性在哪里啊？你们的产品卖点在哪里啊？

答：色谱填料和色谱柱方面：稳定性好，易于放大，高载样量，特殊选择性，宽pH适用范围，溶剂相容性广；仪器方面：采用工业一体化设计，实时在线监控，良好的扩展性，模块化按需求自由组合，方便实用。

售前售后服务、低价格、高品质都是我们的卖点。

【Q16】中低压的纯化设备体积怎么样，也可以在通风橱吗？

答：这也是仪器的优点之一：体积小，可在通风橱中使用。讲义中有图片，触摸屏、泵、检测器、馏分收集器一体化设计，非常节约空间。

【Q17】天津博纳艾杰尔科技开发的"中压快速纯化制备系统--CHEETAH"获过奖吗?

答：中压快速纯化制备系统获得过BCEIA 金奖、国家新产品证书、外观设计专利，且CHEETAH商标已经注册

【Q18】CHEETAH是可以实现直接固体上样，固体样品与填料拌匀混合在上样柱里面，然后让流动相溶解样品带入色谱柱进行分离纯化。想问的是，会不会因为样品和填料混合不均匀，导致目标物的前沿不整齐，从而造成收率过低的问题？如果不会出现这样的问题，是由什么理论支撑的；如果有这样的顾虑，应该如何避免或者在试验过程中如何纠正呢？

答：确实有这样的顾虑，解决方法可参考140#，使填料和样品先在有机试剂中搅匀，然后旋干装柱，可避免混合不均匀

【Q19】博纳艾杰尔科技“CHEETAH 中压快速纯化制备系统”是国家重点新产品计划?有哪些政策支持?

答：本次讲座不涉及

【Q20】CHEETAH HP 100 高压制备色谱仪采用双波长的检测器设计优点有哪些?

答：双波长的检测器设计，一次进样可观测不同波长下各个组分的吸收特征，两波长同时作为收集波长，多重保障，避免组分丢失。尤其是保留时间相同或接近的组分，利用其在不同波长处吸收不同，可作为判别是否为同一物质的依据

【Q21】博纳的质谱是自己的原创产品吗？好像记得天瑞说是国内第一家质谱厂家呢

答：质谱来自Advion公司。Advion联合创始人之一，现任CSO Dr.Jack Henion曾任康奈大学教授，是离子喷雾的发明人该产品可以和博纳艾杰尔自产的CHEETAH系列快速纯化色谱、FLEXA模块化纯化系列等产品联用，之前我发的图就是联用效果。左为CHEETAH，右侧是FLEXA。这就构成了 博纳艾杰尔[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS液质联用产品系列[/url]

【Q22】CHEETAH 中压快速纯化一体机固体上样的最大上样量是多少？

答：这个需要具体样品具体分析了，色谱柱的规格和样品的色谱柱上的分离情况决定了上样量的大小。仪器本身是没有最大上样量的

【Q23】3、手性异构体的拆分与制备

纯度检测条件色谱柱：Venusil CO 5µm 1000A 4.6×150mm流动相：正己烷：异丙醇=80:20柱温：35℃流速：1ml/min紫外波长：215nm上样量：2ul

老师，您好！请问：图谱中单体1和单体2的峰形较差，是不是可以优化色谱条件，改善一下。

答：条件是可以优化的，但是纯化不同于分析，重点是可以得到纯度较高的产品，只要目标组分与两侧峰之间分离良好即可达到检测的目的。过分追求分析条件的完美，耗费时间，有点偏离主线了。呵呵。。

【Q24】4、拉唑类手性异构体的拆分与制备

上述图谱中的峰严重拖尾。

答：纯化的最终目的是得到的产品纯度和质量达到要求，允许有峰型上的不足。

【Q25】高压制备柱的上样量最大是多少，能够承受多大压力呀？

答：要看什么规格的色谱柱，而且与样品的性质也有很大的关系。我用一样品试过10um的XBP Silica柱，1:40的填料比分离效果依然很好。反相制备柱的上样量可能相比之下会稍小一点。每个色谱柱都配有一个检测报告，有压力标准。使用久了压力会高一点，流动相用之前一定要先过滤超声脱气

【Q26】博纳艾杰尔研发的系列手性色谱柱有几类?

答：有适用于正相的Venusil CA、Venusil CO、Venusil CJ三种类型手性柱和正反相分析模式均适用的Amide手性柱。

【Q27】CHEETAH中压纯化一体机和CHEETAH高压纯化一体机从外观看差不多，那内部有哪些不一样呢？要想得到纯馏分必须上高压纯化吗？中压纯化可以满足吗？

答：主要区别是溶剂输送泵不同，MP200流速范围1-200ml/min，最大压力为200psi；HP100流速范围1-100ml/min，增量0.1ml/min，最大压力20MPa.
有些样品是可以在中压上直接收集到纯馏分的。其实实际实验中首先考虑中压，因为中压的上样量大，成本低。如果中压分离效果不好再考虑高压，或者两者相结合使用。

【Q28】快速纯化一体机和普通制备色谱的主要区别是什么？

答：快速纯化一体机的优点：独特一体化设计，实现自动化；可根据客户要求，外接各种检测器：UV、RID、ELSD等；可兼容各种一次性Flash柱和玻璃柱；可液体直接注射上样；可固体上样，也是与其它制备型色谱的主要区别。

【Q29】博纳艾杰尔制备色谱柱能承受的最大压力是多大，最大流速是多大

答：不同色谱柱耐压、使用流速也不同，每支色谱柱出厂后都有检验报告标注压力范围。一般建议内径10mm色谱柱流速可用到4ml/min，内径20mm流速15ml/min，内径30mm流速25ml/min，内径50mm流速60ml/min。流速太大对色谱柱柱压和分离都有较大影响。

【Q30】请问贵公司的中高压一体机是不仅可以串联紫外检测器，还可以串联蒸发光散射检测器或示差等检测器吗？紫外检测器的波长可调范围是多少？

答：是的，中高压一体机通过一款“一对多”的控制系统，可根据不同需求，自由扩展。可以串联ELSD、RI检测器。紫外检测器波长可调范围200-800nm

【Q31】制备色谱在什么行业应用的多些？是不是多用在了工业制造业

答：制备色谱目的在于分离得到一定质量的高纯度产品，需要分离提纯的行业，可以考虑制备色谱，应用领域很广。

【Q32】中压快速纯化制备色谱所用的分离介质的种类多吗?

答：较常用的分离介质可分为以下三类：硅胶：普通硅胶、脱活硅胶；反相硅胶：C18、C8、C4、亲水C18等；HILIC

答：您可以提供一些样品信息，已尝试过的分离条件，我们来帮您推荐。可以拨打我们纯化部的电话022-25321032转238询问技术人员或产品经理详谈

答：填料粒径和孔径都会有一些改变

答：鞣质类成分一般极性较大，可使用正相体系分离。讲义中有介绍某天然酚类样品案例，可供参考。采用的FLASH硅胶柱，乙酸乙酯/石油醚洗脱。

答：在药物纯化、多肽物纯化、天然产物的提取等领域的应用.

答：可以多柱串联

答：可以自由选择的，CHEETAH MP 200有简单实用的柱支架设计，实用于多钟规格的FLASH柱和玻璃柱

答：是的，馏分收集器配有可调节软件，支持13mm、15mm、18mm、25mm、试管及100ml三角锥瓶收集。

答：主要考虑生物样品的种类、被测物的理化性质、所选择的分析或纯化方法三个方面。

答：博纳艾杰尔 Cleanert 蛋白沉淀产品利用特殊的疏水性筛板，可以实现血浆（或血清、尿液等）样品处理的高通量化和自动化，可有效的去除基质中的蛋白、磷脂等。

答：会采用不同规格的仪器设备、色谱柱、分离填料。

答：由于得到了越来越多的客户的信赖和支持，我们产量都在上升，具体数字嘛，保密！呵呵

答：芳环,杂环化合物,卤代物等易极化的物质有较强的分离能力，尤其适用于紫杉醇及其类似物的分离。

答：两个，中英文；仪器操作界面全英版本，有出口，欧洲、日本、美国等地均有用户

答：博纳艾杰尔入选欧洲药典的色谱柱是 Venusil AQ C18，国内名称为 Venusil MP C18详情请见：http://www.agela.com.cn/newDetail.aspx?id=36

另：博纳艾杰尔被收纳入USP数据库的色谱柱有：

Venusil ASB C8

Durashell C18

Innoval C18

Unisol C18

Venusil XBP C18(2)

Venusil XBP C18(L)

Venusil HLP

Venusil XBP CN

详情请见：http://www.agela.com.cn/newDetail.aspx?id=130

【Q51】食品中“塑化剂”博纳艾杰尔有检测方案? （与主题不甚相关，不计入问题数）答：博纳艾杰尔针对“塑化剂”问题完整解决方案如下：白酒中16种邻苯二甲酸酯类物质检测整体解决方案-GC/MS法、HPLC法详情请见：http://www.agela.com.cn/Doload.aspx?id=1078
不同基质食品中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案详情请见：http://www.agela.com.cn/Doload.aspx?id=1080
【Q52】博纳艾杰尔科技生产超纯液相色谱填料吗?

答：是的。

【Q53】半制备色谱柱种类有哪些?

答：按照柱管规格划分有10*250mm、10*150mm两种规格，按照其中填料划分可参照Q4

【Q54】贵公司是不是有三款快速纯化设备FS-1；FS-J；CHEETAH，各自的侧重点是什么？

答：FS-1已经停产，其原型更新升级为CHEETAH系列；FS-J型目前升级为FLEXA系列；CHEETAH是一体化设备，智能化更强；FLEXA是模块化设备，灵活性更强。

【Q55】FLEXA 模块化快速纯化系统是全自动快速纯化制备色谱系统（FS-1）升级吗?

答：见上题

【Q56】制备色谱也可以选择其它的检测器吗？如应该检测器，蒸发光散射检测器，示差检测器等等

答：是的，可外接ELSD、RI，只要通过数据线与仪器上即插即用的高速USB接口相连即可使用。

答：使用新色谱柱之前，必须用100%甲醇30-40倍柱体积进行冲洗活化。

答：具有双重选择性的Optimix C18/SCX,对碱性可解离化合物保留更加均衡，具有适中的保留，有一的选择性和良好的峰形。
Optimix C18/C8对空间异构体具有优异的选择性和良好的峰形
Optimix C18/Amide在梯度洗脱条件下同时分析强极性和非极性化合物。,
都是在此技术下开发的一系列色谱柱

答：Optimix C18/Amide具有独特的选择性，在梯度洗脱条件下同时分析强极性和非极性化合物，对两者皆有保留；C18/Amide的协同作用使其对极性化合物具有更强保留；氨基意志力硅烷化反应，减小了碱性化合物拖尾。

答：可以的。

答：在开发纯化方法时可以使用半制备柱替代分析柱，柱效相近，但半制备可直接收集到馏分，较首先在分析柱上开发方法，再放大至制备收集馏分，分析柱检测效率更高。但是这种较大流速和进样量，对分析仪器容易造成污染，有一定损伤。

答：可以再分析仪器上用，但是容易造成污染、损伤。

答：一般分析色谱柱作为前期方法开发和后期纯度检测的工具，制备色谱柱承担目标组分的分离纯化。通常情况下制备色谱柱是根据上样量，由分析色谱柱放大选定，有时候分析柱放大后不一定适合制备，还需要扩展选择。

答：制备色谱选用的管路较分析仪器要粗一些，制备色谱使用流速大，管路太细产生压力会很高。

答：分析色谱的目的应该是着重样品组成信息，通常研究样品中大部分或全部组分。往往考察某一样品中含有多少组分，或是某些组分在该样品中的含量是多少，目标峰通常是多个，要求每个峰都得到较好的分离。纯化色谱通常研究的是单一组分或是少数组分，只要最后收集的产品纯度符合要求，不需要每个峰都分离较好。其目的就是在最短时间内，以最低成本，得到最纯的产品。

答：首先要考虑分析仪器溶剂输送泵是否可以达到制备色谱柱流速，长期大流速使用对泵是由损伤的；其次分析型仪器检测器灵敏度较高，按制备的上样量很可能会超限，容易造成检测器污染。

答：目前暂无这方面应用。

答：柱头（柱尾）与柱管首先各自固定在一个法兰盘上，两个法兰盘之间通过螺栓紧固在一起，形成一个法兰连接。这种连接能够承受较高的压力。

色谱条件：

色谱柱：Agela Venusil XBP C18 L，4.6×150mm，5µm，150Å（订货号：VX951505-L）

流动相：A：0.1%磷酸 B：乙腈

柱温：室温

检测波长：203nm

进样体积：10μL

谱图：

答：一个概念两种叫法，制备出现的时间更早一些，考虑到纯度和得到产品两个方面，后来很多人都改叫纯化。仪器有人叫做纯化色谱，也有人叫制备液相。

答：FLEXA 模块化快速纯化系统是在4个模块化组件：泵系列、检测器、馏分收集器和控制系统中，可以组装成符合自己需求的全自动快速纯化系统。除标准UV检测器外，对无UV吸收的化合物克提供ELSD和RI，生物相容性检测器可适用于蛋白质及核酸的分离。优势就在于客户可以根据自身需求，自由组合扩展。最大程度的增强了使用的灵活性，降低使用成本。

答：针对多肽样品剂量小，易变质的特点。我们根据样品剂量，采用最佳规格的制备柱，尽量一次纯化出高纯度产品，最大程度减少样品损失。流动相和色谱柱都经预冷后低温下操作，实验室配有氮吹仪，冷冻干燥机等设备，避免馏分后处理过程中变质。

答：冷阱温度可以达到零下60℃的。

答：实验室配有低温冷却循环装置，提供长时间低温环境。

答：使用博纳艾杰尔LC-10F高效液相色谱仪。溶液泵，检测器误差重复性等，均达到国家高效液相色谱仪仪器检定标准。纯化完成后纯品可由客户自检纯度，保证结果真实可靠。

答：可以，一般只对极少数保留很弱的样品采用多柱串联。同时要考虑多柱串联产生的压力较高，应适当降低流速。实验中这样用的很少，一般遇到这样的情况直接尝试其它色谱柱分离

答：是的，可以多柱串联，提高分离效果。也可紫外双波长检测器与ELSD、RI串联，一次进样可得三种检测信息。

答：根据色谱柱规格和样品分离情况而定，实验室有mg级、g级不等，中试和放大生产还可以扩至更大

答：制备柱的概念不仅局限于HPLC制备柱，还包括中压纯化制备柱（FLASH柱）、耐压玻璃柱。HPLC制备柱柱管一般采用不锈钢材质，我们的中压纯化制备柱外壳采用聚丙烯、聚四氟材料。耐压玻璃柱管为SS316超高耐压玻璃材料的。

应助达人

版主辛苦了

应助达人

这么多的问题 版主辛苦啦 昨晚那么晚还在写原创 更辛苦啊

楼主也写原创了？

汇集的问题还是不少啊

整理帖工作量很大,不容易.

又开始整理了，又是一项艰苦的工作

资料是一定要整理的，感谢版友支持！楼内还是留给更多仍有相关问题想了解的版友吧！谢谢！

感谢版主的辛苦整理！