关键字：新手泵压力升高奇怪色谱图软件设置问题

山德

2012/12/25

私聊

液相色谱（LC）

我是新手，最近才接触到色谱分析，要用氨基柱（CNW 250*4.6----5μm）做葡萄酒中糖类的检测，用的岛津液相、示差折光检测器，从接触仪器开始一直做的以水为介质的标准样品，顺带着也能熟悉软件操作。

上周五做了果糖、葡萄糖、蔗糖的混标曲线（以水为介质配的），线性范围：0.2 g/~2g/L。

色谱条件：

流速1.0mL/min；

流动相：乙腈+水（75+25）；预混超声30min。

进样量：25微升；

泵压力4.9Mpa-5.0Mpa；

柱温40℃；

检测器温度40℃。

检测器检测时间：因为2.5分钟的时候有个巨大的溶剂峰，所以我就设置了从6分钟开始检测。

当时三种物质相关系数分别是0.999、0.994、0.999，感觉还行，就按GB/T15038-2006的附录D葡萄酒中糖分和有机酸的测定（HPLC法）中样品的处理步骤处理了一瓶甜葡萄酒，虽然那个方法貌似是用正相色谱做，样品处理要求用强阴离子交换固相色谱柱LC-SAX SPE来处理，因为手头没有，同事就给了我CNW的Poly-Sery的小柱，按甲醇、超纯水、1%氨水活化后，加了2mL样品，用4mL超纯水分2次洗脱，调节pH，加了2滴8%的NaOH，pH做6.6左右。定容至10mL。

我知道甜酒是很甜的，糖度势必很大。当时也并没有想要定量，只是想看看用这个样品处理方式，会有什么杂峰出现，并以此再来调节流动相比例。按曲线相同的条件进样一次，随后又稀释了样品洗脱液20倍后再进一次。当时结果挺好，基本上没有其他杂峰出现，也或许是目标峰太大了遮住了吧。随后又空走了半小时，下班时，我就设了120分钟的0.5mL/min的纯乙腈关机方法。

周一来了，唤醒机器，purge泵和自动进样器后，用是还是上周五的剩下的配好的流动相，和上次一样的色谱条件平衡一个半小时后，用上次的标品，再做上次的那条曲线不过加了4g/L、6g/L、8g/L，编辑的序列后我就做其他事去了，中午吃饭回来就发觉泵压力从5.0Mpa一直上升到8.3Mpa，并且还有上升的趋势，当即我就停止的方法，打电话问了仪器工程师，被告知这个现象非常不正常非常危险，可能是样品中的成分污染了柱子，发生了不可逆的吸附，或是堵住了。同时拆下色谱柱直通检测器，压力在0.3Mpa，基本断定是柱子堵了。

现在想来的确，直接用高浓度样品进样太缺少考虑了，但如果是因为我样品的问题，为什么泵压力升高发生在我之后再做标曲的时候，而不是在我当时进样品的时候开始升高呢？而且不进样品光走流动相压力是不升高，现在基本固定在6.8MPa。

同时这次曲线有一个点的色谱图也很奇怪，我上传了它之前和之后的点，都没有这个现象。

就是这张，为啥会到样品出峰的时候整个基线下陷啊？

我想请大家帮我分析一下这次整个事件到底哪里的问题导致了现在这个现象的发生。

那个点的色谱图是撒现象？

事已至此，这根柱子还能用来做吗？能再生或冲洗吗？

我网上搜索氨基柱如果水相过多、pH过低容易水解，用完用有机相保存，但随后我找来柱子说明书说是短期不用，可以在最后的走的流动相中保存，矛盾吗？我25%的水相算多吗？

另外软件里的baselinecheck的值不能修改，问工程师，但他在电话里也说不清就告诉我大致的方向，能给我个设置的具体位置吗？