求助：有没有利用分光光度法来测定水溶液中葡萄糖的浓度的具体方法？

葡萄糖的紫外吸收不强，估计需要进行衍生。

可以用酶法,加入葡萄糖氧化酶,转化为葡萄糖酸,再加入NADP+,最后在240NM监测NADPH的浓度就可以,有时间给你文献看看

3,5-二硝基水杨酸光度法应该可以吧,我业正在找这个方法,有机会多交流

还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法

原理

还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。



实验材料、主要仪器和试剂

1． 实验材料

小麦面粉；精密pH试纸。

2． 主要仪器

（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11

（2）大离心管：50mL×2

（3）烧杯：100mL×1

（4）三角瓶：100mL×1

（5）容量瓶：100mL×3

（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1

（7）恒温水浴锅

（8）沸水浴

（9）离心机

（10）扭力天平

（11）分光光度计

3． 试剂

（1）1mg/mL葡萄糖标准液

准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂

将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

（3）碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100mL蒸馏水中。

（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞，溶于250mL 70%乙醇中。

（5）6M HCl和6M NaOH各100mL。

操作步骤

1． 制作葡萄糖标准曲线

取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。

表1 葡萄糖标准曲线制作

管 号
1mg/mL葡萄糖标准液

（mL）
蒸馏水

（mL）
DNS

（mL）
葡萄糖含量

（mg）
光密度值

（OD­540nm）

0
0
2
1.5
0


1
0.2
1.8
1.5
0.2


2
0.4
1.6
1.5
0.4


3
0.6
1.4
1.5
0.6


4
0.8
1.2
1.5
0.8


5
1.0
1.0
1.5
1.0


6
1.2
0.8
1.5
1.2



将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至20mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。调波长540nm，用0号管调零点，测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。

2． 样品中还原糖和总糖的测定

（1）还原糖的提取

准确称取3.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。将浸出液（含沉淀）转移到50mL离心管中，于4 000r/min下离心5min，沉淀可用20mL蒸馏水洗一次，再离心，将二次离心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。

（2）总糖的水解和提取

准确称取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL 6M HCl，置沸水浴中加热水解30min（水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查）。待三角瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂，用6mol/LNaOH中和至微红色，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。将定容后的水解液过滤，取滤液10mL，移入另一100mL容量瓶中定容，混匀，作为总糖待测液。

（3）显色和比色

取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。

表2 样品还原糖测定

管 号
还原糖待测液

（mL）
总糖待测液

（mL）
蒸馏水

（mL）
DNS

（mL）
光密度值

（OD­540nm）
查曲线葡萄糖量

（mg）

7
0.5

1.5
1.5



8
0.5

1.5
1.5



9

1
1
1.5



10

1
1
1.5




结果与计算：

计算出7、8号管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。



还原糖（%）=
查曲线所得葡萄糖毫克数×
提取液总体积

测定时取用体积
×100

样品毫克数




总糖（%）=
查曲线所得水解后还原糖毫克数×稀释倍数
×0.9×100

样品毫克数

附 注

1． 离心时对称位置的离心管必须配平。

2． 标准曲线制作与样品测定应同时进行显色，并使用同一空白调零点和比色。

3． 面粉中还原糖含量较少，计算总糖时可将其合并入多糖一起考虑。

不知道有没有用哦

为什么不用液相色谱法呢
可以很精确的测出浓度呢

4楼的过程好复杂啊！