仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
免疫沉淀反应(三)——对流免疫电泳实验
省部重点实验室
2013/02/20
私聊
生命科学仪器综合讨论
对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果,故可用于快速诊断,敏感性比双向扩散技术高10-15倍。
血清蛋白在pH8.6条件下带负电荷,所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷,而且它的分子量又较大(为r球蛋白)。所以游动慢。更重要的是抗体分子受电渗作用影响较大,也就是说点渗作用大于它本身的迁移率。所谓电渗作用是指在电场中溶液对于一个固定固体的相对移动。
琼脂是一种酸性物质,在碱性缓冲液中进行电泳,它带有负电荷,而与琼脂相接触的水溶液就带正电荷,这样的液体便向负极移动。抗体分子就是随着带正电荷的液体向负极移动的。而一般的蛋白质(如血清抗原)也受电渗作用的影响,使泳动速度减慢,但它的电泳迁移率远远大于电渗作用。这样抗原体就达到了定向对流,在两者相遇且比例合适时便形成肉眼可见的沉淀线。
一、材料
1. 诊断血清:免抗人免疫血清
2. 待检血清:人血清
3. 阴性对照血清
4. pH8.6、离子强度0.05 M 巴比妥缓冲液配方:巴比妥1.84 g,巴比妥钠10.3 g,加蒸馏水1000 ml,调pH至8.6。
5. 缓冲琼脂板:将纯化的琼脂用pH8.6离子强度0.025的巴比妥缓冲液(用0.05 M 的巴比妥缓冲液稀释一倍即可)配成1.5%的琼脂,加入0.01~0.02%流柳汞防腐,保存冰箱内备用。
6. 电泳仪
7. 其他:生理盐水、打孔器、微量进样器
二、方法
1. 琼脂板的制备根据需要可选用大玻板(6 cm×9 cm)和(小玻片)两种。大玻板约需琼脂10 ml,小玻片约需3.5 ml,凝固后按图打孔,方法同琼脂扩散实验。
2. 加样:左侧孔内加患者血清(原血清及10倍稀释血清各占一孔),右侧内加抗血清,每片应有阳性对照。
3. 电泳
用国产普通电泳仪。其内加0.05 m pH8.6的巴比妥缓冲液,加至电泳槽高度的三分之二处,注意两槽内液面尽量水平。将加好样品的玻板置于电泳槽上,抗原端接负极,抗体端接正极,用2~4层滤纸浸湿作盐桥,滤纸与琼脂板联接处为0.5 cm。以板宽度计算电流,以板的长度计算电压。要求电流量为2~3 mA/cm,即大板为20 mA,小板为10 mA。电压为4~6 V/cm。通电45分钟—2小时后观察结果。
4. 结果观察
在黑色背景上方,用散射光多个角度观察,在对孔之间有白色沉淀线即为阳性对照应出现明显的白色沉淀线。如果抗原,两极微沉淀条纹不清晰,于37℃保温数小时可增强沉淀条纹的清晰度。
5. 影响结果的因素
(1)抗原抗体的比例:抗原抗体比例适应时容易出现沉淀带,反之不易发生。当抗体浓度恒定时,被检血清含甲胎蛋白浓度高时,作10倍、20倍或更高倍数稀释可以提高阳性率。随稀释度的增加,抗原抗体的比例发生变化,沉淀线由靠近抗血清孔向逐步移向两孔中间,并可出现不典型的沉淀线如弧形、八字须形、斜线形,这些也是阳性,应予注意。
(2)组电泳缓冲液其电泳结果以巴比妥钠—盐酸缓冲液灵敏度最高。巴比妥—巴比妥钠次之,Tris缓冲液更差。
(3)电压与电流时电泳时间需要长些:电压电流增大时,电泳时间可更短。但电压过高则孔径变形,电流过大抗原抗体蛋白易变性,干扰实验结果。一般选择5 ml/cm,电泳时间改为1.5小时。
分
该帖子已被
版主-zhang8826857
加2积分,加2经验;加分理由:鼓励分享
相关话题
1
五颜六色的采血管
2
人用肝素化采血管的质量控制
3
生气与疝气有关吗
4
硅胶假体-乳房植入物的安全性
5
分光光度计标准操作规程(SOP)
近期热榜
赛默飞实验室产品焕新计划有奖调研!
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
报名开启:ICS2024第十三届光谱网络会议!
推荐收藏!盘点中药材及饮片检测解决方案
热门活动
甄选国优仪器,助推设备更新
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
工业发酵过程优化与控制研究进展
分享
2012/12/10
新型生物传感器可探测唾液及眼泪中的葡萄糖浓度
分享
2012/11/14
【分享】普通感冒、流感、甲型H1N1流感的关系和区别
2009/05/06
细胞培养完整手册(3)
分享
2012/10/18
Myc标签序列及常见问题解析
资料
2023/09/19
如何明辨重组蛋白、融合蛋白与天然蛋白:重组蛋白常见问题详解
资料
2024/01/10
【分享】AKATA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤
2008/10/22
气管扩张球囊压力自动控制解决方案
第十六届原创
2023/08/03
【我们不一YOUNG】结缘仪器,一起结缘,与仪器信息网一起成长
原创
2024/07/01
心血管检测仪打开后出现ch375dll.dll电脑丢失怎么办
已应助
2024/07/01
出售贝克曼DXC800生化分析系统
原创
2024/06/21
编织袋拉力机
原创
2024/06/14
求助贴: AKTA锯齿型洗脱曲线的解决办法
求助
2024/06/02
5-6折安捷伦耗材优惠价出售
分享
2024/05/30
液氮补给罐静态蒸发率范围解析
原创
2024/05/21
杂交瘤技术的应用及局限性
资料
2024/05/20
能力验证频次
求助
2024/06/27
环保设备为催化燃烧装置,监测固定源废气非甲、二氧化硫、氮氧化物。 是否需要保证催化燃烧装置脱附状态下时才进行检测?才算有效?
已应助
2024/06/27
实验室检测记录能否使用Excel保存
求助
2024/06/28
求助,非甲烷总烃测定中,除烃空气0.4mg/m3,怎么计算的呢?是按总烃计算公式吗?
求助
2024/06/29
检测报告一定要有判定结果吗?
求助
2024/07/01
仪器点火失败
求助
2024/06/28
求助安捷伦GC7890B,EPC无响应解决办法
求助
2024/07/01
icp被腐蚀了
原创
2024/06/27
免疫沉淀反应(二)——琼脂扩散实验
转帖
2013/02/20
免疫沉淀反应(一)——环状沉淀反应
转帖
2013/02/20
如何成为一名优秀的实验室管理者?
分享
2013/02/20
质检总局质量管理司相关负责人解读首席质量官制度
分享
2013/02/20
捕集氧气的填料是什么呢?
讨论
2013/02/20
【分享】2013第一期培训补上照片
2013/02/20
采购的东西到了,你们有人通知吗?
咨询
2013/02/20
贝克曼157荧光检测器的参数
求助
2013/02/20
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...