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免疫沉淀反应（四）——免疫电泳实验

省部重点实验室

2013/02/20

生命科学仪器综合讨论

免疫电泳实验是先将抗原物质在琼脂凝胶中做电泳分离，然后于凝胶槽中加入抗体血清。使抗原抗体进行双向扩散，在比例适宜部位形成特异的抗原抗体沉淀弧线。

每条沉淀弧线代表一组抗原抗体复合物，故可用抗原成分分析；且可以根据其迁移率与抗体所出现的特异反应进行鉴定。

一、材料

1. 待检标本（抗原）：正常人血清。

2. 抗体：正常人血清的家兔免疫血清。

3. 1.5%离子琼脂（系用巴比妥缓冲液配制的）。

4. 电泳仪。

5. pH8.6、离子强度0.05 M 巴比妥缓冲液配方：巴比妥1.84 g，巴比妥钠10.3 g，加蒸馏水1000 ml，调pH至8.6。

6. 其它：载物玻片，直径3毫米打孔器，20 mm×2 mm 玻璃铸型，微量进样器。

二、方法

1. 取载物玻片（7.5×2.5 cm）加上3.5 ml 1.5%琼脂凝胶，制成2毫米厚的琼脂板。

2. 按图位置，在琼脂板未凝固时，放入抗血清槽铸型，注意勿使铸型全部浸入琼脂中，待凝固时再打孔。

3. 加待检标本：用微量进样器往孔中加1~5 μl。

4. 电泳：电压9~7 V/cm，泳动15~20小时。

5. 电泳后取出抗血清槽铸型，加入抗血清，进行双扩散，一般在24小时内沉淀弧出全。

6. 观察结果：或描绘、拍照或进行染色，染色后的标本便于结果分析及保存。

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