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免疫沉淀反应（五）——火箭电泳实验

省部重点实验室

2013/02/20

生命科学仪器综合讨论

火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为：在电场作用下，抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动，二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线，而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系，因此本法可以测定样品中抗原的含量。

一、材料

1. 诊断血清（抗体）：抗人IgG或IgA免疫血清。

2. 待检血清（抗原）：人血清。

3. 参考血清。

4. pH8.6，离子强度0.05 M 巴比妥缓冲液配制（见对流免疫电泳实验）。

5. 其它：琼脂粉，微量进样器，打孔器，玻璃板，电泳仪。

二、方法

1. 抗体琼脂板的制备

同单向扩散法，但注意稀释液应用pH8.6离子强度0.05 M 的巴比妥缓冲液。

2. 打孔见下图。

3. 将用缓冲液稀释的适宜浓度的参考血清及适当稀释的抗原（人血清）分别加入各孔中，每孔10或20 μl，要求加量准确而不外溢。

4. 把加完样的免疫琼脂板放入电泳槽中进行电泳，电压4~6 V/cm，电泳时间1~5 h，直到大部分抗原孔前端出现顶端尖窄而完全闭合的火箭状沉淀线，关闭电源。

5. 取下琼脂板，以抗原孔中心为起点，量出各火箭状沉淀线的高度。同单向琼脂扩散法绘制标准曲线，查出待检血清中Ig含量。

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