刚学紫外，有几个问题请教。

俺用过紫外，没做过标准曲线，⊙﹏⊙b汗一个。

1、一种药物在做工作曲线的时候，先选一个该药物高浓度的溶液测试一下其吸收波长，是这样的么？

（这是为了找到最灵敏、干扰最少的波长来进行测试，一般是最大吸收波长。选什么浓度关系不大，只要吸光度数值合适就行。）



2、为什么要先测试吸收波长呢?直接做工作曲线不可以么？就是说大概知道药物的波长在200-500nm之间，直接把各个浓度的溶液扫这一段的紫外不就可以了么？

（同上。每次样品测试都要扫描，你不觉得麻烦？况且，使用光谱扫描方式测得的吸光度值，在准确性、重现性上均不及固定波长测试方式。）


3、制备工作曲线的药物浓度如何定制，见资料上写A值应该在0.2-0.7之间，我还得挨个浓度测试一下，才能确定该浓度合适不合适？

还有的文献我看直接就是配100mg/ml的贮备液，然后吸取1、3以及5和7、9ml进行10ml定容，都是这样做么？



我就是对配工作曲线的浓度不知如何确定，在没有文献指导的情况下。

（对于稀溶液，比如0.5g/L以下的溶液，浓度和吸光度接近线性关系，这样你只要用样品空白液为参比，测得一个已知浓度溶液的吸光度，也就可以估算出合适的浓度范围了。比如你配了一个浓度为0.01g/L的溶液，测得A=1.000，那如果你将样品减少到0.001g/L，吸光度应该会降低到0.1左右）



4、溶剂的选择，溶剂只要溶解药物就可以？还是说PE紫外只能用哪几种溶剂？

（选溶剂有几个原则，与仪器没有关系，最基本、最主要的是：

1.能很好地溶解所测样品；

2.与样品不会反应，比如水解反应；

3.在所测波长范围内没有明显的吸收，不会干扰测试对象；

4.安全，这个写起来就有点复杂了.....）

非常非常感谢！！！

还有个问题请教，工作曲线只要涵盖我要测试的浓度范围即可？
就是说在这样的条件下，我可以阶梯性的选择5个或6个浓度做工作曲线就行？

一般是让你要测的浓度落在标曲中间即可.

当然为了方便,一般曲线做到吸光度0.7左右.

先选一个该药物高浓度的溶液测试一下其吸收波长。

是的