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[求助]用LC-MS做组织分布时原型药响应越来越高?

液质联用(LCMS)

  • 做一个大鼠组织分布预试验,用LC-MS检测,同一样品隔一定时间(2小时或1晚上)再测时,含量越来越高达到第一次测定的2倍左右,内标响应无很大变化。1.样品最后一步是用甲醇溶解,原型药在甲醇中是很稳定的。
    2.做样前同一样品连续进样几次其响应是比较稳定的。
    3.该方法做血药时是很稳定的。
    请大家帮我分析一下原因?多谢多谢!
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  • 瓢虫

    第1楼2006/06/23

    同一样品隔一定时间(2小时或1晚上)再测,该样品是重新提取,还是提取后进样?如果是提取后进样,可能原因是:溶剂挥发或代谢物在复溶溶剂中分解成目标化合物。

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  • Easy-Boy

    第2楼2006/06/23

    有可能是目标化合物转化。

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  • cxz5

    第4楼2006/06/23

    谢谢楼上俩位的指点!
    是处理之后的同一份样品,放置一段时间再测,目标化合物的浓度越来越高。原来浓度很低的组织,放置后再测,其峰面积明显增大。
    1.溶剂挥发的可能性较小。因为进样瓶放2个小时,没有那么多溶剂挥发。
    2.如果是目标化合物和其他代谢物发生了转化,这种情况如何确证?原型药是一个皂苷,在样品处理时如何控制转化?
    恳请大家提点建议,新手上路,多谢了!

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  • cxz5

    第5楼2006/06/23

    想到以下俩点,不知是否合理?
    1.样品处理后,代谢物容易转化成原形药吗?这是一个皂苷,文献报道它的代谢产物主要是掉糖的,脱甲基的,还有开环反应.
    2.有没有可能是原形药与某种结合型存在一个动态平衡,放置后结合型的不断释放出游离型的?如果是这种情况该怎么处理?

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  • 瓢虫

    第6楼2006/06/26

    一般药物在体内的二相反应是生成葡萄糖醛酸或硫酸酯轭合物,固可以用相应的酶水解后检测,或者可以用酸水解检测,但这样可能要测苷元。你还可以查下相关文献。
    Good luck!

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  • cxz5

    第7楼2006/06/26

    1.谢谢!该皂苷在体内主要是发生一相水解反应。苷元和原型药的活性是有差异的,所以组织分布还是计划测原型药。
    2.新发现一个问题是,用已腈沉淀蛋白法处理组织样品后发现有离子抑制现象,进几针后响应明显降低。样品处理打算再加大乙腈用量或考察SPE。大家还有什么建议?
    谢谢!

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  • 瓢虫

    第8楼2006/06/26

    皂苷用乙酸乙酯做液液萃取应该还可以,你试过没?
    固相萃取稳定性不是特别好,成本也较高。

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  • cxz5

    第9楼2006/06/26

    再次谢谢斑竹的热心帮助!
    这个皂苷连四个糖,极性较大。液液萃取我试过,乙酸乙酯基本提取不出,乙酸乙酯加入部分异丙醇还是不行。所以只好在沉淀蛋白或者是SPE上下功夫了。另外,不知道用强酸如高氯酸处理如何,进质谱有何影响?

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  • 瓢虫

    第10楼2006/06/26

    如用高氯酸沉淀蛋白,处理后最好还要中和一下,此外它对质谱估计有很强的抑制作用,所以建议不要去试了!你还是先试试SPE吧!
    不行的话,个人建议还是作水解检测苷元,很多文献多这么做!
    Good luck!

    cxz5 发表:再次谢谢斑竹的热心帮助!
    这个皂苷连四个糖,极性较大。液液萃取我试过,乙酸乙酯基本提取不出,乙酸乙酯加入部分异丙醇还是不行。所以只好在沉淀蛋白或者是SPE上下功夫了。另外,不知道用强酸如高氯酸处理如何,进质谱有何影响?

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