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qingqingcao老师讲HPLC(之三),高效液相色谱泵和进样器性能判断

  • qingqingcao
    2013/07/08
    药物分析
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 摘要:本次课主要讲授HPLC泵流量准确性测试,自动进样器吸取溶液准确性测试,目的是为了让同学们懂得,如何用简单的方法判断HPLC性能是否好。

    关键词:泵流量,准确性,进样器

    引言

    俗话说的好:工欲善其事,必先利其器。磨刀不误砍柴工。我们的仪器设备在好的状况下,才能够发挥出其最好的本质。同时,今天的讲课,也让同学们熟悉一下HPLC,色谱柱。同时,让同学们知道如何判断HPLC泵流速准确性,自动进样器进样准确性,HPLC色谱柱柱效判断。因为一般的仪器分析教材不会介绍这些内容,然而,这些内容确实在实际工作中很重要,所以,qingqingcao老师今天着重讲这些方法,希望同学们能够喜欢并且掌握。

    注:全部的课程都是以RP-HPLC为对象,所以,用到的流动相都是水系-醇系,水系-乙腈系等。不涉及正相色谱。

    1.泵流速准确性测试

    泵在前一课上讲,主要起到动力作用,通过设定泵流速,让流动相以一定并且稳定的流速输送流动相。假设我们设定的流速是1.0ml/min,那么流动相是否以1.0ml/min流速流经色谱柱呢。判断这个,我们就需要对HPLC泵做泵流速准确性测试。

    首先给出大致的概念和方法。

    流量准确性高效液相色谱仪器流量准确性,用纯水,以1ml/min流速收集5分钟,称取其质量,换算成当时温度的体积,计算其流速准确度。



    FS——设定值,比如设定1.0ml/min

    Fm——测量值。

    Ss——设定值误差。

    首先,我们想像,为什么用纯水?

    因为纯水方便得到,而纯水不容易挥发,同时纯水的密度在各个温度下是已知的。但是,在这里,我想和大家指出的,不同的溶液其粘度不同,所以,如果输送醇-水系的,一般可以以纯水所代表的泵流速表示。而如果流动相是醇或者是乙腈,异丙醇等,准确地测试泵流速用相应的流动相。如果不需要很准确,可以用纯水代替。

    我用几个词来概括一下如何来测试泵流量准确性

    1) 换流动相为纯水

    2) 拆下色谱柱,让进色谱柱的那接口流着溶液,调节设定值1.01.52.0ml/min

    3) 称空容量瓶质量。m 1

    4) 接水并计时5.00min

    5) 称接水容量瓶质量 m 2

    6) 查水温,并查出体积,

    7) 计算5分钟流出的水的体积(ml

    8) 计算流速(ml/min

    9) 计算设定值测定值误差。

    给一个例子。

    我设定泵流速为1.0ml/min,测定泵流速准确度。首先称容量瓶为29.6589g,以此流速,接水5.00分钟,再次称容量瓶(盖盖子),其质量为34.6664,查的当时的水的温度是24.5℃。查的该温度下水密度为:0.997170g/ml。计算设定值误差

    我们如此解

    Δm=34.6664g-29.6589g=5.0075g

    V=5.0075g)÷0.997170g/ml=5.0217ml

    Fm=5.0217ml÷5.00min=1.004ml/min

    Ss=1.004-1.00)÷1.00×100%=0.4%

    答曰: 1.0ml/min流速下其设定值符合要求。

    当然,对于测试需要多次测试,多流速测试,在此,我只是介绍方法。还有需要在多次同一个流速测试,判断泵流量稳定性,我给出思路。也就是说,在同一个流速下,我测定n次(n3),选取最大流速,最小流速,和平均流速,计算在此设定流速下的泵流量稳定性。

    2. 进样器进样准确度测定

    进样器进样准确度的思路是一样的。也是通过设定和称重方法。我给出例题。

    例如:测定自动进样器吸样准确性测试。自动进样瓶装80%高度的纯水,称得其质量为5.6412g,其纯水温度为24.5℃,密度为0.997170g/ml。设吸取量为50μl。连续吸取20次,擦干外壁的水汽,天平称得为:4.6325g

    解:Δm=5.6412-4.6325=1.0087g

    V=1.0087÷0.997170=1.0116ml

    20次,那么一次体积为

    1.0116×1000(μl)÷20=50.58(μl

    答曰:进样器的进样体积为50.6μl

    如果是这样的话,很遗憾,需要叫工程师来调节下进样器了。

    结语

    今天主要讲了泵流量准确性测试, 自动进样进样准确性测试。这两个方法都是使用纯水,天平等简单的设备,而且能够做出比较准确的结果,这是HPLC性能准确性中最重要的两个指标。当然,还有检测器波长准确性测试,高效液相色谱柱好坏判断。这两个内容将在下次讲授。敬请期待。

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  • qingqingcao

    第1楼2013/07/08

    这里,我想和各位同道朋友们说明下:

    首先,我确实是老师,中等职业学校的新老师。用qingqingcao老师,只是一个文学性的表述。没有那种权威专家的意思,而是一种启发新手意思。同时青青草老师,觉得很可爱。

    我从事仪器行业十多年了。主要从事HPLC方法学开发,色谱柱装填,仪器维护维修等等。我在这里发原创,主要是想整理下我之前的工作经验。对于HPLC是我22岁大学毕业时候就开始玩的,也得到了许多朋友的指点,在仪器信息网上,阅读了不少材料,向前辈们致谢。也因为,我最近不玩HPLC多年,所以许多思维只是停留在5年前,所以,我在写作中,难免会有自己主观的东西,跟不上时代的东西。

    再次,我希望同志们能够找出我的错误,我会虚心修改。

    我的本意只是推广,能够抛砖引玉,让新手们能够快速懂得HPLC,书本上的知识,确实在考试中是重要的,但是,工作中,可以把我的东西看看,如果有助于新手提高,我也是积功德了。

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  • 七七49

    第3楼2013/07/08

    楼主巨作连篇啊,挺好

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  • zdac

    第4楼2013/07/08

    这个讲的好像有些简单,有些抽象

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  • 好日子

    第5楼2013/07/08

    对,大家更喜欢直观些的内容,容易理解

    zdac(zdac) 发表:这个讲的好像有些简单,有些抽象

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  • qingqingcao

    第6楼2013/07/08

    是吗?我想,大家能够看下例题吧。

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  • 老多_小多

    第7楼2013/07/09

    自动进样的例子,我们如果得到这个样品重量?

    就是我们该如何去收集它

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  • 雨山日月

    第8楼2013/07/09

    讲得很好,谢谢分享

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  • lujianbo0918

    第9楼2013/07/09

    很好,细节上的东西,我还缺乏。谢谢,受教。

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  • 翠湖园

    第10楼2013/07/09

    如果讲解过程中配一些图片,效果会更好

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