HPLC-ELSD法测定测定桔梗中桔梗皂苷D的含量

1.仪器与试药

1.1仪器
安捷伦1100高效液相色谱色谱仪，Alltech 2000ES型蒸发光散射检测器，KQ250超声波清洗器（江苏昆山超声仪器厂），高速离心机（上海飞鸽）十万分之一分析天平（梅特勒公司）。

1.2试药
桔梗药材：由市场购买提供。经鉴定符合2010版中国药典规定。
对照品：桔梗皂苷D对照品（购自中国食品药品鉴定研究院，批号：111851-201001）
乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Diamonsil C₁₈色谱柱 (5um, 4.6*250mm)，流动相乙腈-水( 25：75) ，柱温30℃，流速1.0 mL·min ^{－ 1} ，进样量10μL;ELSD参数: ELSD漂移管温度110 ℃,载气(N2)流速2.8 L/min，理论板数按桔梗皂苷D峰计算应不低于3000。

2.2 对照品储备液

精密称取桔梗皂苷D对照品约10mg, 置25ml量瓶中，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.525mg的溶液，即得。

2.3供试品溶液

本品粉末(过二号筛)约2g，精密称定，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量；摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置水浴上蒸干，残渣加水20n：。l，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20rnl，合并正丁醇液，用氨试液50rnl洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，加硅胶0.5g拌匀，置水浴上蒸干，加于硅胶柱[100～120目，10g，内径为2cm，用三氯甲烷一甲醇(9：1)混合溶液湿法装柱]上，以三氯甲烷一甲醇(9：1)混合溶液50ml洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇-水(60：20：3)混合溶液100ml洗脱，弃去洗脱液，继用三氯甲烷-甲醇水(60：29：6)混合溶液100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.4线性关系考察

精密量取项下对照品储备液0, 1, 2, 3,4mL, 分别置5 mL量瓶中, 用甲醇定容, 摇匀, 即得5个浓度的对照品溶液, 分别进样10μL, 测定峰面积积分值。以进样量(μg)的常用对数值X为横坐标, 峰面积积分值的常用对数值Y 为纵坐标, 进行线性回归, 回归方程为:Y= 1.399X + 5.028 r= 0.9998桔梗皂苷D进样量在0.525～5.25μg范围内线性关系良好。

2.5精密度

取2.2项下的对照品储备液适量, 用甲醇稀释成0.0525mg/mL的对照品溶液, 连续进样6次, 记录桔梗皂苷D的峰面积积分值, 计算RSD( n= 6)为0.32%, 表明精密度良好。

2.5重复性实验

取桔梗样品1共6份, 每份2g, 精密称定, 依2.3项下方法制备供试品溶液, 进样测定, 外标法计算桔梗皂苷D含量。结果桔梗样品中桔梗皂苷D含量平均值(n=6)为0.28%, RSD为1.4% , 表明方法的重复性良好。

2.6 稳定性实验

取桔梗样品的供试品溶液, 在本文色谱条件下, 每隔4 h进样1次, 共6次, 结果桔梗皂苷D峰面积积分值的RSD(n=6)为0.97% ,表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 加样回收率实验

取已测知桔梗皂苷D含量样品6份, 每份1g, 精密称定。分别加入0.0208 mg/mL的对照品溶液5 mL,依2.3项下方法制备供试溶液, 进样测定, 计算回收率。结果平均回收率(n=6)95.6%,RSD为1.8%。

2.8 样品测定

取不同来源桔梗样品, 依2.3项下方法制备供试品溶液, 在2.2项色谱条件下进样测定, 以外标法计算各样品中桔梗皂苷D含量。结果3批样品中桔梗皂苷D的含量分别为0.26%，0.32%，0.36%。

桔梗皂苷D 图谱

供试品图谱

3.讨论

皂苷类成分紫外吸收较弱，采用高效液相色谱(HPLC) 方法利用紫外检测器检测，只可在近紫外区测定^[3]。2010年版《中华人民共和国药典》首次将桔梗皂苷D规定为桔梗药材的含测指标,采用HPLC-ELSD测定其含量,但并未注明具体实验参数^[4],且国内目前有关桔梗液相方面的研究报道较少,所得结论也不一致,特别是以桔梗皂苷D为指标作为某一制剂的质量标准来考察的几乎没有。经方法学考察,表明本法准确可靠、重复性好,灵敏度高，为含有桔梗皂苷D成分的中成药质量控制提供了一种有效的分析途径。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部.北京：化学工业出版社,2010：229.

[2] 朱丹妮,舒娈,郅慧,等.HPLC-ELSD法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量[J].植物资源与环境学报,2001,10(4)：11-13.
[3]狄天云, 王刚力, 林瑞超.HPLC- ELSD法测定短葶山麦冬中短葶山麦冬皂苷C的含量［J］．药物分析杂志，2011, 31( 1)：

[4]丁大勇，高菲等.HPLC-ELSD法测定桑菊感冒片中桔梗皂苷D的含量[J].中国中医药信息杂志，2012,19（3）：54

应助达人

图文并茂啊 呵呵 好原创

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桔梗是市场买的成品吗