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由前处理起飞-----硝基呋喃代谢物（已更新完毕）

sukiliang

2013/08/08
色谱

私聊

液质联用（LCMS）

前言

在这个版已经混了快半年了！也看到有一些网友说硝基呋喃代谢物很难做，说实在的，开始接手液质没多久就要做硝基呋喃代谢物的期间核查，那时还真的什么都不懂，这个实验到底要怎么做？开始的时候连标线都做不出来，后来没多久才搞明白，标线终于做出来了，但是现在回收率只能算合格！望各位大侠指教。

硝基呋喃类药物很不稳定，很容易生成代谢物，由于代谢物比较稳定也有致癌作用，所以在食品安全的检测中检测硝基呋喃代谢物。

参考20752-2006的标准

= =！本来说好了水产那边要建实验室，我们再也不用做水产品的，但是某些人为了那顿饭，为了装好人把这条巴鱼接回来了，每次来一条鱼我就要做14个样品，悲催！

1.左边一排是标准曲线每个管子分别写着要配置的标准曲线的浓度，右边的是我的样品分别写着巴鱼1号，巴鱼2号，因为不是做委托实验我懒所以选择加那么高浓度的+5ng/ml，+5ng/ml*，+10ng/ml，+10ng/ml*

2.好了，偶们去称样了！

3.配置好的甲醇+水（2+1），吸取10ml加入试管中。这时候你会发现，本来透明的鱼肉会有点不透明的，因为蛋白质变性了（我记得有一次貌似没加这东西，过柱的时候出现悲催的情况。）

下面内个是一个称好的透明鱼肉

、

加入酸化甲醇后

= =！透明的肉肉立马变色，蛋白质变性了！

4.加完以后盖上盖子，在漩涡上震荡。

5.离心，在这里建议用高速冷冻离心，

（1）.鱼肉的纤维很细，时间一长就会松散掉。

（2）能使一些脂肪冻结

6.弃去离心完的液体，倒的时候要小心，否则连肉都倒出来！

7.每根管里面加入5ml 0.2mol/ml盐酸

8.开始加标了！同一时间标准曲线的那点也开始做了

算好自己最终需要的浓度，往管里加入标准品！

eg：偶最后定容到1ml，由于衍生后的液体，调ph后全部过柱，浓缩定容上机，没有稀释倍数so，把标准品稀释到0.1mg/L，0.5ppb的管内加入5ul，1ppb管中加入10ul，如此类推

然后就到均质刀头那打碎。

= =！这里地方窄，我们转移阵地！

开始打样！

9.再用5ml 0.2mol/ml盐酸冲洗刀头，如果冲洗不干净多加点都无所谓！

10.加衍生剂！---先说说秤衍生剂，我每次秤的时候都不会秤得很准，标准上是0.075g溶于10ml，每次我都是秤到差不多0.9几，衍生剂多了应该没关系，作用是衍生而已嘛，二甲亚砜依然是10ml。

好了，关灯作业。

每个样品加入0.5ml的衍生剂，标准上是0.3ml，还是内句，加多了没关系！

37摄氏度水浴避光衍生。

11.第二天回来后，加入5ml 0.1mol/l磷酸氢二钾，然后调ph

调ph的时候一定要注意，尽量不能调过头了，影响回收率！不知道是不是我们的ph计有问题，每次调到4点多的时候，就开始要一滴滴来调了，每次到四点多的时候加一滴会上得很快的。

12.调完ph后、高速冷冻离心

注意，离心完以后要迅速转移到另外一根干净离心管里，否则时间一长会出现以下情况，肉全都浮起来了。又要重新离心！

、

13.过柱

HLB柱子——3ml甲醇活化——6ml水平行——所有样品移到柱子——用水清洗一次离心管，把剩下的也倒入管内——6ml的水平行——吹干——6ml乙酸乙酯洗脱。

过完样品的时候，建议用水清洗以下离心管，再加入柱子里，尽量让管里残留的药物洗出。

、

14.氮气吹干

15.初始流动相定容。漩涡震荡

16过膜上机！

楼主最近发现一样很好玩的样品瓶！自带滤膜的样品瓶。

写好一系列的编号。

把试管的溶液倒到写好编号的样品瓶里，样品倒到刻度线就可以了！

把样品瓶的第二部分拿出来

第二部分的底部是一个滤膜来的！

、

把第二部分压进去

既能过膜，同时也可以上机了！

仪器条件

小结：

由于内标还在路上，so此次样品没加入内标。but，通过这次试验看到sem和aoz的回收率相对很低！

= =!内标终于到了：

数据补上：

待测物的质谱条件（已加入内标参数）：表5-1

很奇怪，发现加入内标的情况貌似相反了，难道是我的问题？

不加内标的时候AMOZ的回收率还能见人，加入内标以后AMOz的就不怎么好了！

二、参考农业部标准783

线性范围和相关系数

在该试验条件下标准溶液的浓度在0.5、1、2、5、10、20、50ng/ml各取20ul进样，记录色谱图，线性方程和相关系数见表7。

表7 回归线性方程和相关系数

表8 回收率和精密度数据

使用内标后待测物的质谱条件详见表5-1

表9 使用内标的回归线性方程和相关系数

表10 回收率和精密度数据

最后附上离子流图

图1：加标的样品

AMOZ及其内标提取离子流图

AHD及其内标提取离子流图

SEM及其内标提取离子流图

AOZ及其内标提取离子流图

精
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分
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相关话题

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私聊

八杯水

第1楼2013/08/08

做得好详细啊，赞一个！前处理很关键，尤其是对于复杂基质。

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私聊

小丶风

第2楼2013/08/08

楼主用的什么液相？
那样品瓶是从哪里买的？

是否可以通用？
求品牌、货号及价格（方便的话）

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私聊

zhw19811005

第3楼2013/08/08

非常详细的前处理过程

+关注

私聊

pxqbear

第4楼2013/08/08

步骤有些多楼主发现的小瓶子很神奇，对于大量需要过滤的样品来说是福音啊

+关注

私聊

sukiliang

第5楼2013/08/09

我们是用安家的液相！

我实验室也有水的液相，安家的玻璃的样品瓶也能用到水家的液相上，但是盖子使用带切口的盖子！

如果要把这种样品瓶用到水家的液相上最好要用有预切口的瓶盖！

样品瓶也是安家的，货号是5190-1416，价格比普通样品瓶要贵哦！貌似一千多一盒！
小丶风(yujianlin) 发表:楼主用的什么液相？
那样品瓶是从哪里买的？

是否可以通用？

求品牌、货号及价格（方便的话）

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私聊

小丶风

第6楼2013/08/09

感谢提供信息

刚才看了下，过滤容量才0.5ml，好像不太适用啊，一般定容都是1ml的
sukiliang(sukiliang) 发表:我们是用安家的液相！

我实验室也有水的液相，安家的玻璃的样品瓶也能用到水家的液相上，但是盖子使用带切口的盖子！

如果要把这种样品瓶用到水家的液相上最好要用有预切口的瓶盖！

样品瓶也是安家的，货号是5190-1416，价格比普通样品瓶要贵哦！貌似一千多一盒！