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【资料】-中华人民共和国行业标准(SB/T10203—94)果汁通用试验方法 (续1)
通改前非
2006/07/24
私聊
食品常规理化分析
式中:X——果汁中总酸的含量,g/100g(或g/100mL);
V1——样品滴定耗氢氧化钠标准溶液的体积,mL;
V0——空白试验耗用氢氧化钠标准溶液的体积,mL;
C——氢氧化钠标准溶液的浓度,mol/L;
m——样品的质量,g(或mL);
G——吸取稀液的量,mL;
250——果汁样品定容后的总体积;
K——换算果汁中适当酸的系数:苹果酸0.067;柠檬酸0.064;酒石酸0.075。
3.2.12 允许差
同3.2.6。
3.3 氨基态氮的测定(酸度计法)
3.3.1 原理
氨基酸分子中含有羧基,又含有氨基,加入甲醛以固定氨基,使溶液显示酸性,用氢氧化钠标准溶液滴定以酸度计测定终点,根据氢氧化钠溶液的消耗量,计算出氨基态氮的含量。
3.3.2 仪器
同3.2.2。
3.3.3 试剂
3.3.3.1 0.1mol/L氢氧化钠标准溶液(按3.2.3.1配制与标定)。
3.3.3.2 0.05mol/L氢氧化钠标准溶液:用感量0.1g的天平,迅速称取分析纯氢氧化钠2g,溶于蒸馏水中,稀释到1000mL,摇匀,按3.2.3.1标定。
3.3.3.3 中性甲醛溶液:在使用前1h量取200mL甲醛溶液于400mL烧杯中,置于电磁搅拌器上,边搅拌边用1mol/L氢氧化钠溶液调至pH8.4。
3.3.3.4 pH6.88缓冲溶液(用磷酸盐标准物质直接配制)。
3.3.4 测定步骤
将酸度计接通电源,预热30min后,用pH6.88的缓冲溶液(3.3.3.4)校正酸度计。称取适量匀样(氨基态氮的含量为1~5mg)于烧杯中。将烧杯置于电磁搅拌器上,电极插入烧杯内试样中适当位置。如需要加入适量蒸馏水。开动电磁搅拌器,先用0.1mol/L氢氧化钠慢慢中和试样中的有机酸,当pH达到7.5左右时,再用0.05mol/L氢氧化钠溶液调至pH8.4,并保持1min不变。然后准确加入10mL中性甲醛溶液(3.3.3.3),再用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液(3.3.3.2)滴定至pH8.4,记录加入中性甲醛溶液后消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的毫升数。同时作空白试验。
3.3.5 结果计算
按式(4)计算氨基态氮的含量。
………………………………(4)
式中:X——果汁中氨基态氮的含量,mg/100g(或mg/100mL);
V0——空白试验耗用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的体积,mL;
C——氢氧化钠标准溶液的浓度,mol/L;
V1——加入中性甲醛溶液后,滴定试样消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的体积,mL;
m——样品的质量,g(或mL);
0.014——与1mL氢氧化钠标准溶液[C(NaOH)=1.000mol/L]相当的氮的质量,g。
3.3.6 允许差
同一样品同时或连续两次测定结果的相对误差:氨基态氮≥10mg/100g,≤±2%;氨基态氮<10mg/100g,≤±5%。取两次测定的算术平均值作为结果,精确到小数点后一位。
3.4 抗坏血酸的测定(荧光法)
3.4.1 原理
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后,与邻苯二胺反应生成有荧光的化合物,其荧光强度与抗坏血酸浓度成正比,在激发波长338nm,发射波长420nm处测定。
样品中有其他荧光物质的干扰,通过加入硼酸,使脱氢抗坏血酸形成复合物,它不与邻苯二胺生成荧光化合物,而测出其他荧光杂质作为空白荧光强度加以校正。
3.4.2 仪器
3.4.2.1 荧光分光光度计
3.4.2.2 实验室常用设备
3.4.3 试剂
3.4.3.1 邻苯二胺溶液:称取20mg邻苯二胺,于临用前用水稀释至100mL。
3.4.3.2 偏磷酸-乙酸液:称取15g偏磷酸,加入40mL冰乙酸及250mL水,加温,搅拌,使之逐渐溶解,冷却后加水至500mL。于4℃冰箱可保存7~10天。
3.4.3.3 0.15mol/L硫酸:取10mL硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1200mL。
3.4.3.4 偏磷酸-乙酸-硫酸液:以0.15mol/L硫酸液为稀释液,其余同3.4.3.2配制。
3.4.3.5 50%乙酸钠溶液:称取500g乙酸钠(CH3COONa•3H2O),加水至1000mL。
3.4.3.6 硼酸-乙酸钠溶液:称取3g硼酸,溶于100mL乙酸钠溶液(3.4.3.5)中。临用前配制。
3.4.3.7 抗坏血酸标准溶液(1mg/mL)(临用前配制):准确称取50mg抗坏血酸,用溶液(3.4.3.2)溶于50mL容量瓶中,并稀释至刻度。
3.4.3.8 抗坏血酸标准使用液(100μg/mL):取10mL抗坏血酸标准液,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100mL。定容前试pH值,如其pH>2.2时,则应用溶液(3.4.3.4)稀释。
3.4.3.9 0.04%百里酚蓝指示剂溶液:称取0.1g百里酚蓝,加0.02mol/L氢氧化钠溶液,在玻璃研钵中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为10.75mL,磨溶后用水稀释至250mL。
变色范围:pH值=1.2 红色
pH值=2.8 黄色
pH值>4 蓝色
3.4.3.10 活性面炭的活化:取200g活性炭(粉状),加入1000mL10%盐酸溶液,加热回流1~2h过滤,用水洗至滤液中无铁离子(用硫氰酸盐确证有无铁离子存在)为止,置于110~120℃烘箱中干燥,备用。
3.4.4 测定步骤
3.4.4.1 样品液的制备:称取适量匀样(试样中含抗坏血酸浓度在40~100μg/mL)于100mL容量瓶中,加入等量的偏磷酸-乙酸溶液(3.4.3.2)。用指示剂(3.4.3.9)调试样品酸碱度。如呈红色,即可用3.4.3.2稀释,若呈黄色或蓝色,则用3.4.3.4稀释,使pH为1.2,并用(3.4.3.2)溶液稀释至100mL。
3.4.4.2 氧化处理:分别取样品液(3.4.4.1)及标准使用液(3.4.3.8)各100mL于250mL带盖三角瓶中,加2g活性炭,用力振摇1min,过滤,弃去最;妆几毫升,收集滤液,即样品氧化液和标准氧化液,待测定。
3.4.4.3 各取10mL标准氧化液于2个100mL容量瓶中,分别标明“标准”及“标准空白”。
3.4.4.4 各取10mL样品氧化液于2个100mL容量瓶中,分别标明“样品”及“样品空白”。
3.4.4.5 在“标准空白”和“样品空白”溶液中各加5ml硼酸-乙酸钠溶液混合摇动15min,用水稀释至100mL,在4℃冰箱中放置2~3h,取出备用。
3.4.4.6 于“样品”及“标准”溶液中各加入5mL50%乙酸钠溶液,用水稀释至100mL,备用。
3.4.4.7 标准曲线的制备:取上述“标准”溶液(3.4.4.6)(抗坏血酸含量10μg/mL)0.5。1.0,1.5和2.0mL标准系列,取双份分别置于10mL带盖试管中,再用水补充至2.0mL。荧光反应按3.4.4.8。
3.4.4.8 荧光反应:取(3.4.4.5)中“标准空白”和“样品空白”溶液及(3.4.4.6)中“样品”溶液各2mL,分别置于10mL带盖试管中。在暗室迅速向各管中加入5mL邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35min,于激发波长338nm,发射波长420nm处测定荧光强度。标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标,对应的抗坏血酸含量为横
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