02年的国标现在落后了

02年的国标现在落后了

现在经济高速发展，各方面的需求也是飞速的。对于我们实验室的工作人员也是如此，既要提高自身的职业素质，也要完善实验室的设备、技术、规范等。当然检测项目也在增加，需要的检测方法也越来越多。

现在我们进行检测时大多都是要有依据的，一般都是依据国标、地标和像药典之类的行标等的。然而需求在快速的增加，有些标准的改进和完善的速度略显慢了些。

最近我做实验时就遇到了一个问题（相信好多实验室工作人员都遇到过）。我们检测的是饲料中的维生素B₁、B₂、B₆，依据的是国标GB/T14700—2002、GB/T14701—2002、GB/T14702—2002中的高效液相色谱法。明白的人一看就知道这几份国标是2002年起草的，一直延续到现在还在使用（实际饲料检测甚至还有2000年，九几年起草的国标）。这些国标已十多年没变了，十年中国却发生了翻天覆地的变化。这个标准还算简单，参考这个标准做这几种维生素却让我吃尽了苦头。下面就具体说一下，先说下维生素B₁的测定的国标GB/T14700—2002（其它两种维生素的国标的情况和这种非常类似）。

首先说一下色谱条件。

先看下国标是怎么说的吧。

维生素B1、B2、B6检测时流动相一样。

国标方法中的色谱柱是waters 公司的Nova-pak C18，4um，3.9 X 150mm色谱柱。这款色谱柱市面上并不多，进口的可能也比较贵吧。流速是0.8ml/min，这个流速我觉得是和色谱柱的内径是有关的，3.9um内径的色谱柱0.8ml/min的流速是最佳流速。现在我们碰到的分析型色谱柱内径大多都是4.6um的，这个内径的最佳流速是1.0ml/min。温度25℃--28℃，这个温度我不知道是色谱柱温度，还是检测池温度，是环境温度还是系统温度，这个有些难理解，幸好这个温度和室温差不多，还好控制（现在的技术控制温度是绝对没问题的，不管是控制哪里，关键是得知道要控制哪里）。保留时间7min—8min，我做的却相差甚远。下面就具体介绍下。

色谱条件：

检测器：紫外（UV）检测器

色谱柱：Pgrandsil STC C18 250*4.6mm，5um

流动相：与该国标中所说的相同

流速：1.0ml/min

柱温：27℃

进样量：10ul

波长：246nm

我的色谱条件与国标的有一些差别，国标的保留时间7min—8min，我的保留时间可能会晚一些，我估计可能在10min—15min吧，所以我把采样时间设成20min。结果连续进了很多样，在这个时间段内就是不出峰，郁闷。后来我想是不是时间短了些，还没到出峰时间采样就已结束了，但这个已经比国标的时间长了很多了呀。抱着怀疑的态度，我把采样时间从20min改为了30min。结果还是不出峰。

这就奇怪了，这套设备刚做完其它的样品，是正常的呀，现在难道坏了。设备各方面运行的都挺正常，我觉得应该是没问题的。接下来我又把流动相中的甲醇含量从14%调到20%，结果在20min内仍没出峰。调到25%仍没出峰，再大没敢调了，因为一是这个条件已经比国标提供的高了很多了，出峰时间应该缩短很多才是；二是怕流动相中甲醇含量太高有盐结晶析出，损坏色谱系统。

这就头疼了，怎么会出现这种情况，怎么就不出峰呢。我是不想弄了，于是我请我的一位同事帮我重新做一遍看看，看看是不是我哪一步操作错了。他做结果还是没出峰。这个结果我们都很意外，我们觉得可能还是仪器的问题。于是我们又全面的检查了仪器，发现一切正常，并没问题。

这太奇怪了，我没办法了。索性就随便进一针，出就出，不出就先冲冲仪器吧，采样时间我也设成了300min。

说也奇怪，意外出现了。维生素B₁这次竟然出峰了，出峰时间是我之前想也没想到的31.3min。我怕这次出峰是次意外，于是又连续进了三针，结果都出峰了，出峰时间大约都是31.3min。哦，原来这样，在这个色谱条件下出峰这么晚呀，和国标上差了这么多。

维生素B₁对照品色谱图：

维生素B2和维生素B6检测的色谱条件与维生素B1的完全一样，维生素B₂对照品色谱图：

这个出峰时间也比国标中的10min晚的多，是39.6min。

维生素B₆对照品色谱图：

这个出峰时间同样比国标中的4min—5min晚，是22.4min。

下面一个问题，那就是样品前处理。

国标上样品前处理是这样说的。

国标提取样品中的维生素主要是靠超声20min提取。现在饲料样品各种各样，有的样品超声20分钟样品中的维生素根本不能完全提取，这个我们也见识过了。结果是同一样品每处理一次，结果都不一样，有时差的还挺多。我们现在采用的方法是先超声10min,再静止2小时，最后再超声10min。这样同一样品多次处理结果基本一样，效果很好。

后来我咨询了相关专家，他们给我的建议是：

1. 样品要粉碎；
2. 溶解、提取时间适当长一些；
3. 超声时温度尽量高一些，最好能到80℃左右；
4. 超声提取后最好能离心处理。

最后还有一个问题，那就是如果样品中有在所测维生素出峰时间附近有干扰杂质时，要适当调整流动相中的甲醇含量，尽量使所测维生素色谱峰与干扰杂质色谱峰完全分离，必要时采用梯度洗脱。下面这个就是我们测得一个维生素B₁的色谱图：

像这个色谱图，维生素B1出峰都三十多分钟了，峰附近还有干扰物，而且挨的很近，那出峰时间要是在7min—8min，那这两个峰不就粘成一个峰了。所以这个方法的出峰时间是长了些，但对某些样品的分析还是有利的，还是很好的。

02年的国标现在是不是落后了，很多地方是不是都该有变化了。我觉得国标过一段时间就得修改下了，否则可能就会落后了。

在做实验时国标只作参考，具体问题要具体分析，要有相应的应对方法。有些国标已显落后，希望相关部门能及时完善、补充。