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761 VS QuEChERS (下)-----11种氨基甲酸酯液质测定（更新完毕）

sukiliang

2013/10/25
色谱

私聊

液质联用（LCMS）

直奔主题吧，先晒出亮点：

1.QuEChERS方法简单快捷

2.本次实验采用两种QuEChERS 的spe试剂盒提取（一种是普通的QuEChERS，一种是含有gcb的QuEChERS），观察回收率

3.本次实验使用761前处理，用了三个品牌公司的spe柱，对比回收率

4.液相条件11种氨基甲酸酯在10分钟内全部出峰，11种药分离10个峰（可能有版友做得更好的，莫笑）

5.楼主每次都会带来一些新奇的玩意，你见过ufo般的固相萃取吗？敬请关注！

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刚到货，先验货再说

这个是粉包

spe试剂盒

一、QuEChERS前处理方法

1. 称取10g的样品，由于色素最深的枸杞被拿了，现在只好拿西洋菜了

2. 加入标准品（浓度详见数据整理部分）

.

3.用量筒加入色谱纯乙腈10ml，紧记，在做QuEChERS前，乙腈最好先放入冰柜里冰冻起来，因为加入粉包的时候离心管会发热

4.匀浆机匀浆

匀浆前先准备一缸大清水下图2L的烧杯装的是清水，一小杯分析纯的乙腈，下图中2L烧杯旁就是乙腈，一卷纸巾

清水用了清洗刀头，分析纯乙腈用来清洗刀头防止加标样品污染

5.匀浆结束后，往每个离心管里加入一个陶瓷颗粒，然后把粉包里的粉尽量完全倒入离心管里

陶瓷颗粒有助于粉包里的粉和样品能打成一片

加完粉包，那个时候离心管开始发烫了

6.盖上盖子，用手猛烈震荡完后，怕再不均匀用漩涡震荡器震动

7.离心5min

8.吸取上清液到另一根装有分散式spe试剂盒里

白色是普通的，黑色那种是含有gcb的

吸取3ml上清液到管里

然后又猛烈的震动1min

9.再次离心，吸取1ml上清液到样品瓶中

10看了还是含gcb的比普通的颜色要清一点。

颜色深一点的是普通的，颜色浅一点是含有gcb的

11. 35℃吹近干，用初始流动相定容1ml上机

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小小结：

最后定容，算好是1:1上机无稀释倍数

秤样10g，加入10ml乙腈，为了spe试剂盒有足够的样品过滤出，so楼主吸取3ml，经剧烈震荡1min后，离心，吸出1ml样品吹近干，定容上机。

（回收率等详见数据处理部分）

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二、761前处理

1.称样还是10g

2.加入20ml乙腈

因为只是761的方法，用分析纯的乙腈即可

3.还是匀浆

匀浆前。还是和QuEChERS的匀浆方法一样！

匀浆后

匀浆后加氯化钠就可以离心了，以前不匀浆偷懒用振荡器震半个小时代替匀浆，经过实验比对过，发现匀浆以后的回收率会比震荡过的要好！

4.加氯化钠，离心5min

注意，楼主试过先加氯化钠再加乙腈（此法不选择匀浆，而用震荡代替匀浆），这样回收率不如先加乙腈再加氯化钠的好，为了能出一份准确的报告还是别图方便！

离心5min

5.吸出上清液，每根试管里吸取4ml，35℃氮吹近干

1）为什么要近干？

全干会影响回收率

有时候吹得死干的话，加入1+99（甲醇+二氯甲烷）不能完全把壁上的东西洗脱下来

6.用3ml1+99的甲醇+二氯甲烷定容，漩涡震荡

仔细看看，液体漩涡的时候，壁上的东西完全被洗脱下来

7.过spe柱

最后一亮点出现了！注意罗，ufo来了

1）我们先吧接受样品的试管放到缸里面！

先打开上面的盖子，把试管晒进去，这个固相萃取一共24个孔

但是必须要先想好自己想要的顺序才放哦。因为这个固相萃取不像普通的那种那样洗完柱子以后再放试管架的。这个一部搞定的

缸里白色的那个圆盘很重要的哦！活化柱子的废液就看他了

2）然后把上面的盖子盖上去，把要用的spe柱子放好。

注意哦，第一如果上面没放好的话是盖不紧了，一定要卡到位

第二，我们第一步是洗柱子，so我们要把缸移到waste那里，留意下图中红色的圈圈。其中白色那个点点有指示作用！

第三，如果盖上盖子以后指示的那点点不在waste那里，我们可以双手掌顶着旁边两个紫色圈圈中白色的地方，手指轻轻的一运劲一提起，一移就可以移到waste的状态

第四，当我们开始收集样品的时候，把他转到collect就可以了。

最重要一点就是，如果样品好过不需要用到色魔的泵的时候，记得把废液缸放地上，否则废液难以流入废液缸中！

3）过完柱的效果

8. 40℃吹置近干，初始流动相定容2ml，上机！

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小小结：此方法也是1:1上机，无稀释倍数

10g样品，20ml乙腈，从中取4ml，最后定容到2ml

（回收率等详见数据处理部分）
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三、数据处理:

----------------------------（数据处理有点多了，星期一见）

= =！

对了，楼主已经计算好，最后还是1:1上机，没有稀释倍数！

下班前送上MRM图

1ppb

1ppb 色谱柱是Atlantis t3柱
如果要优化液相条件看来要拖更长的时间

同一流动相，个人感觉还是Poroshell 120的色谱柱出峰比好而且峰分出来比较多！

两种QuEChERS的空白

下图可见含GCB的QuEChERS空白要比普通的干净一点

三种spe柱的空白

总的来说，s家的柱子过滤得没前两家的干净

加标2ppb的图

加标样品2ppb的图

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小结：

加了gcb的QuEChERS比普通的回收率偏低了，但是对于色素深的样品如果不用加gcb的话对质谱还是没那么好！

spe环节里，个人感觉还是a家的spe柱不错！

涕灭威砜和涕灭威亚砜这两种药很奇怪，出来的数据竟然是一模一样的，不知道其他版友是怎么样的呢？

涕灭威这药很奇怪，回收率不怎么好，其他版友又做得怎么样呢？

不过总的来说，QuEChERS的方法符合标准要求的回收率。而且这玩意刚开始接触没多久，前处理用用功回收率肯定还会提高，spe柱的回收率是好，但是时间太长。

QuEChERS也是往后发展的一个方向！

欢迎留言讨论！

楼主还发现一个严重的问题，只要那些样品一过膜，回收率就会降低一大截，有没有版友遇到这种情况？

---------------------------------------

ps：此次实验里含有大量某家公司的产品，这并无广告之意，对于楼主来说，新奇有趣的楼主都会去试验！

--------------------------几天以后

自己找亮点。。。。。。。。。。

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第1楼2013/10/25

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ie4680180

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应助达人

不错的过程，有现实指导意义。学习了。

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wulin321

第3楼2013/10/27

应助达人

楼主戴的这种手套叫什么是一次性的吗，我们用的是一次性的，太浪费，想换一种

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wulin321

第4楼2013/10/27

应助达人

过程很详细很容易看得明白

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hujiangtao

第5楼2013/10/28

应助达人

我们用761的前处理上液质呵呵

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雾非雾

第6楼2013/10/28

应助达人

丁腈手套，一次性使用比较好，安谱有卖，好像不到1元1只。
wulin321(wulin321) 发表:楼主戴的这种手套叫什么是一次性的吗，我们用的是一次性的，太浪费，想换一种

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雾非雾

第7楼2013/10/28

应助达人

所以要加强前处理的净化，这样才有利于质谱系统长期稳定的使用。
hujiangtao(hujiangtao) 发表:我们用761的前处理上液质呵呵

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chy57589893

第8楼2013/10/28

楼主老师能否简单介绍下那个固相萃取仪。谢谢

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sukiliang

第9楼2013/10/28

白色那种是高邦的灭菌手套，但是这些手套一碰有机相就会有黏黏的感觉，蓝色那种是丁腈手套！

- -！我一天下来都换好几双了！建议楼主如果碰有机溶剂多的话还是用丁腈手套
wulin321(wulin321) 发表:楼主戴的这种手套叫什么是一次性的吗，我们用的是一次性的，太浪费，想换一种