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【许愿原创】众里寻他，只愿你更好——记一次色谱条件优化【fengmo4668推荐】

逆天一棍

2013/12/18
光谱

前面发表过一个帖子，介绍的是关于一个项目的耐用性的研究。

当时用的是一个进口牌子的液相色谱柱和国产博纳艾杰尔的色谱柱进行了一个比较。结果表明，博纳艾杰尔的柱效以及分离度不输进口色谱柱的（详见【许愿原创】博纳艾杰尔与安捷伦的液相色谱柱之对比http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20131123/5073045/）。

最近做有关物质研究的时候，试了一下以前的方法，做出来的峰形居然是这样的：

这里面，主药成分为22min左右的峰，后面还有一个很大的峰是辅料。但是与主峰来说，附近太多的小杂峰，定量准不准都两说，关键没法定有关物质的个数。而且让人看上去，给人的第一印象都不好。

进了一针溶剂异丙醇，才发现原来空白溶剂都这样：

看来是色谱条件惹的祸啊。

这样的话，只能从色谱条件的优化来入手了。

对于有关物质来说，我最想用的还是等度法。但是事实证明，等度上做这个有难度，乙腈的量少了，后面的辅料峰冲洗不出来，乙腈的量多了，前面的杂质分离不开。也就是说，还只能选择梯度的方法。现在需要做的，就是选择合适的梯度。

根据以前的预实验，筛选了两种梯度方式。

一是变换梯度到18min，然后走等度。

结果溶剂的色谱图变成了这样：

样品的色谱图如此：

从两张色谱图的比较看，17.6min的主药峰与溶剂的色谱峰还是有部分重叠。

二是变换梯度到39min，然后回到初始条件。

异丙醇的色谱图：

样品的色谱图：

主峰的保留时间在20.5min左右，而异丙醇的乱峰是在22.5min才开始出现的。基本上实现了主药的分离，理论上可以对其准确积分，保证了定量的准确性。而且前面各保留峰的峰型以及分离度几乎没有变化。而且采集时间也几乎是主药保留时间的2倍。是一个值得接受的方案。

因此，暂定的色谱条件就是这样：流动相A在0到39min内，由100%逐渐减少到47%，流动相B在0到39min内，由0%逐渐增加到53%，保持1min，然后2min内回复到A为100%的状态。检测波长为240nm，进样量为10μL，色谱柱为博纳艾杰尔Venusil XBP C18（L），4.6mm*150mm，5μm，（Cat：VX951505-L，S/N：V9520515BM0106）。

精
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dahua1981

第1楼2013/12/18

应助达人

考虑换色谱纯的异丙醇岂不是更省事

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dahua1981

第2楼2013/12/18

应助达人

风魔发的有点晚了如果早点的话我就推荐你了

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精
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逆天一棍

第3楼2013/12/18

换了几种溶剂了，包括甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、异丙醇。

要不不适合于样品，要不和异丙醇的出峰相似，所以最后没有调整异丙醇。

而且，异丙醇在等度的时候，是没有这些乱七八糟的峰出来的，只有走到后面的梯度才会出来，估计是流动相组成比例引起的。但是这个比例不变化这么多，后面那个很大的辅料又很难走出来，只能这样了。有后续了再提高吧，呵呵
dahua1981(dahua1981) 发表:考虑换色谱纯的异丙醇岂不是更省事

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逆天一棍

第4楼2013/12/18

这个是这两天才做出来的。前一段时间净做这个优化了。感觉最后这个比例还可以。就发上来了。绝对的新鲜出炉啊！

没推荐没关系，如果觉得还不错的话，还有机会支持一下的。谢谢大华。
dahua1981(dahua1981) 发表:风魔发的有点晚了如果早点的话我就推荐你了

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逆天一棍

第5楼2013/12/18

我这个一直用的都是色谱纯的异丙醇。
dahua1981(dahua1981) 发表:考虑换色谱纯的异丙醇岂不是更省事

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三人行

第6楼2013/12/19

杂质峰太多，分离有难度。

0

精
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逆天一棍

第7楼2013/12/19

是啊，很多还是不必要的杂质峰。
三人行(jncxyy2012) 发表:杂质峰太多，分离有难度。

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wulin321

第8楼2013/12/19

应助达人

没有用过。支持一下原创

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zdac

第9楼2013/12/19

这个杂质太多了，对结果影响肯定是挺大的

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逆天一棍

第10楼2013/12/19

其实一部分是我积分参数的原因，积分参数放的很小很小。
另一部分，就是制剂中其他辅料的出峰。真正的与主药相关的杂质，可以通过保留时间比对出来，不是很多的。

0

精
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