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胡萝卜汁中抗氧化能力指数（ORAC）的测定

  • huangza
    2013/12/21
    药物分析
    • 私聊

食品常规理化分析

  • 胡萝卜汁中抗氧化能力指数（ORAC）的测定



    【生活中的仪器分析】食品安全——饮品卫生大检测

    抗氧化能力指数（ORAC），是一种测量不同食品抗氧化能力的国际通用标准单位，检测数值愈高代表其抗氧化能力就愈强。是目前评价抗氧化物质抗氧化活性的最为准确、灵敏度高、应用范围广的方法之一，目前国际上已经有很多商品的标签注明抗氧化能力（ORAC值）。ORAC值以Trolox当量μmol Trolox equivalent/g (μmol TE/g)或μmolTrolox equivalent/L (μmol TE/L)表达。 (Trolox为一种标准抗氧化物，其测定方法以及原理在另一篇原创中有详细的概述。）

    1 仪器与试剂
    1.1 仪器
    Biotek Synergy 2多功能酶标仪，Biotek自动移液分液系统；
    梅特勒万分之一天平；96孔微孔板；Eppendorf移液枪；
    玻璃器皿：10mL容量瓶、50mL容量瓶、100mL容量瓶、1000mL容量瓶、100 mL烧杯；1000μL移液枪、100μL移液枪、1mL移液管。

    1.2 试剂
    K2HPO4，NaH2PO4，荧光素二钠盐，Trolox标准物质，
    AAPH 2,2’-Azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride，双蒸水。

    2试剂的配制
    2.1 磷酸盐缓冲溶液
    2.1.1缓冲溶液储备液
    0.75 M K2HPO4：130 g K2HPO4溶于1 LddH2O；
    0.75 M NaH2PO4：90 g NaH2PO4溶于1 LddH2O

    2.1.2缓冲溶液工作液
    分别量取K2HPO4贮备液81 mL，NaH2PO4贮备液19 mL，混合后用ddH2O定容至1000 mL，这样得到75 mM，pH 7.4的缓冲溶液，冰箱下贮存。

    2.2 荧光素钠盐溶液
    荧光素钠盐贮备液1：称取0.0456g荧光素钠盐定容到100 mL磷酸缓冲液，4℃黑暗贮存；
    荧光素钠盐贮备液2：1000μL贮备液1用磷酸缓冲液定容至100mL，4℃黑暗贮存；
    荧光素钠盐工作液：800μL贮备液2用磷酸缓冲液定容至100mL，4℃黑暗贮存。

    2.3 Trolox标准溶液的配制
    0.0125 g Trolox定容到50ml磷酸缓冲液中，得到1000μM的贮备液，−20℃ 贮存。然后用磷酸缓冲溶液依次稀释成100，50，25，12.5，6.25μM的工作液。

    2.4 AAPH溶液
    0.414g AAPH完全溶于10mL pH7.4，75mM的磷酸缓冲溶液，即得153mM的溶液，冰浴保存。（8h的有效期，现配现用）

    3样品测定

    用自动移液系统对饮品进行稀释，用缓冲溶液依次稀释成1:100，1:200，1:400，1:800系列。然后将空白、样品各稀释梯度以及标准抗氧化物(Trolox)各20μL，分别与160μL荧光素溶液混合后37℃保温30min，然后再加入AAPH溶液20μL，迅速开始测定，利用酶标仪配备软件记录荧光强度，初始荧光强度值记为f0，以后每隔一段时间测定一个点，荧光强度分别记为f1,f2 …，抗氧化剂作用下荧光衰减曲线下的积分面积，扣除无抗氧化剂的空白曲线下面积，得出抗氧化剂的曲线下净面积(Net AUC)。抗氧化剂的ORAC值是通过其荧光衰退曲线的曲线下净面积与标准抗氧化物质Trolox的曲线下净面积相比得出的。



    3.1 Trolox标准曲线

    使用0、6.25、12.5、25、50、100μM的Trolox标准工作溶液，绘制标准曲线，试验表明不同浓度的Trolox与Net AUC(曲线下净面积)相关系数都在0.99以上，说明不同浓度的Trolox与其Net AUC具有线性关系。Y=0.16*X+3.59，R2=0.997。



    3.2 重复性实验

    每个样品有4个稀释梯度（其中1：100的稀释梯度超过了曲线最高点而无法计算），重复测定2次，结果如下。

    N123456平均值RSD%
    ORAC20099.121934.525743.420415.622213.025974.522730.011.3


    4.小结与讨论

    有研究证明，老化和各种生活习惯病的发生过程都与活性氧有关，自然地抗氧化就与预防衰老联系在一起。因此，抗氧化的作用就很重要了，对于延缓身体退化，防止肌肤衰老，预防疾病等都有一定的功效。我们人体的抗氧化物质有自身合成的，即有一套抗氧化系统，当抗氧化系统不能应付过多的自由基时，我们就需要通过抗氧化食物供给了。

    通过检测紫胡萝卜汁的抗氧化能力指数ORAC值为22730.0μmol TE/L，具有极强的抗氧化能力，起主要抗氧化活性的应该是其含有丰富的胡萝卜素、原花青素等。当然日常生活中，有很多具有抗氧化的食物，如葡萄、蓝莓、山竹、胡萝卜、番茄等等。另外，富含硒的食物也具有较强的抗氧化能力。
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    +关注 私聊

  • huangza

    第1楼2013/12/23

    应助达人

    抗氧化能力的测定，好像这个项目开展的不多。

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  • huangza

    第3楼2013/12/24

    应助达人

    抗氧化剂属于添加剂，其检测含量用的液相吧？具体不太清楚哈

    冰火女孩(xuwanxiu2006) 发表:抗氧化剂是气相测定

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  • hhciq

    第4楼2013/12/25

    这个检测的真不多，比较抽象

0
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  • zyl3367898

    第5楼2014/01/03

    应助达人

    没见过这种试验，学习一下。

0
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  • 快乐

    第6楼2014/01/05

    应助达人

    一般是用气相色谱

    huangza(huangza) 发表:抗氧化剂属于添加剂，其检测含量用的液相吧？具体不太清楚哈

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