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血浆蛋白结合率高的药物如何进行前处理？

penglin1984

2013/12/29

液相色谱（LC）

最近做血浆样品遇到了这样的情况：做方法学的时候，空白血浆添加药物出的峰形很好，与杂质峰的分离度等都很好，所有方法学考察的数据都很好。到做实际样品的时候问题出现了，在进样后1min的时候以及目标峰刚结束的时候出了两个很大的杂峰（不成峰形，就是一大坨），后面那个杂峰干扰目标峰。刚开始以为是进样时间长了导致柱子脏（实际上柱压没变化），就用常规冲洗方法反复冲洗色谱柱，再进样还是这个情况，而且很有规律：每次序列进样前5个样品没问题，从第6个样品开始那两个大杂峰就出现了。百思不得其解，后来查药物手册才知道这个药物与血浆蛋白的结合率达99%。

我的前处理方法是：200uL血浆+2mL正己烷/异丙醇（95：5，V/V）涡旋2min后10000r/min离心10min,取上层40度N2吹干，流动相复溶，12000r/min离心10min,取上清HPLC检测。

尝试过加酸（1mol/L盐酸）或者乙腈等沉淀蛋白方法，杂峰多、干扰严重且回收率低。用我上述方法回收率等方法学数据很好，峰形也很好，就是做实际样品时出现了那样的情况。

想请群里的朋友帮忙想想办法，解决这个问题！谢谢！

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zhaohua8011

第1楼2013/12/30

蛋白处理通常用异丙醇、甲醇、乙腈等溶剂处理！

0

武灵

第2楼2013/12/30

楼主用0.1mol/L的盐酸试试呢，1.0的浓度较高，不知道会不会导致蛋白的水解生成其他未知的东西。

0

liufeilzu

第3楼2013/12/30

优化前处理呗，加大有机溶液提取或者酸的含量

0

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