着色剂名称 | 检出限(ng) | 定量下限(ng) | 检出浓度(μg/g) | 最低定量浓度(μg/g) |
酸性黄36 | 2.0 | 5.0 | 3.0 | 6.0 |
颜料橙5 | 2.0 | 5.0 | 3.0 | 6.0 |
颜料红53:1 | 5.0 | 8.0 | 4.0 | 10.0 |
苏丹红Ⅱ | 2.0 | 5.0 | 3.0 | 6.0 |
苏丹红Ⅳ | 2.0 | 5.0 | 3.0 | 7.0 |
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第1楼2014/02/24
5 分析步骤
5.1 样品预处理
唇膏类:称取0.5 g(精确至0.001 g)样品,置10 mL具塞比色管中,加四氢呋喃(3.3)与乙腈(3.1)混合液(体积比1:9)至刻度,摇匀,涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀,超声提取30 min,放至室温,必要时,转移至10 mL具塞塑料离心管中,以10000 rpm离心5 min,上清液经0.45 μm滤膜过滤,滤液作为试样溶液备用。
散粉类:称取0.5 g(精确至0.001 g)样品,置10 mL具塞比色管中,加四氢呋喃(3.3)、二甲基亚砜(3.4)和乙腈(3.1)混合液(体积比1:1:8)至刻度,混匀,超声提取30 min,放至室温,上清液经0.45 μm滤膜过滤,滤液作为试样溶液备用。
指甲油类:称取0.5 g(精确至0.001 g)样品,置10 mL具塞比色管中,加5~6 mL乙腈(3.1),混匀,超声提取30 min,放至室温,加乙腈(3.1)稀释至刻度,摇匀,静置,必要时,转移至10 mL具塞塑料离心管中,以10000 rpm离心5 min,上清液经0.45 μm滤膜过滤,滤液作为试样溶液备用。
若样品中被测成分的浓度超过了线性范围的上限,需对试样溶液进行适当稀释处理。
5.2 高效液相色谱参考条件
色谱柱:C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)。
流动相:A:乙腈
B:缓冲溶液(10 mmol/L四丁基氢氧化胺(3.6),10 mmol/L 柠檬酸(3.7),用氨水(3.8)调节至pH 8.2)
梯度洗脱,洗脱程序见表1。
表1 梯度洗脱程序
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) | 流速(mL/min) |
0.00 | 30 | 70 | 1.0 |
5.00 | 80 | 20 | 1.0 |
10.00 | 100 | 0 | 1.0 |
15.00 | 100 | 0 | 1.0 |
20.00 | 30 | 70 | 1.0 |
22.00 | 30 | 70 | 1.0 |
表2 阳性结果确证时相对离子丰度比的最大允许偏差
相对离子丰度 | >50% | >20%至50% | >10%至20% | ≤10% |
允许的相对偏差 | ±20% | ±25% | ±30% | ±50% |
液相色谱-质谱联用法参考条件:
色谱参考条件:
色谱柱:C18(2.1 mm×150 mm, 3.5 μm);
流动相:乙腈-0.1%甲酸水溶液系统梯度洗脱,梯度洗脱条件见表3;
柱温:30 ℃;
流速:0.3 mL/min;
进样量:5 μL。
表3 梯度洗脱条件
时间(min) | 乙腈(%) | 0.1%甲酸溶液(%) | 流速(mL/min) |
0.00 | 78 | 22 | 0.3 |
3.00 | 78 | 22 | 0.3 |
5.00 | 95 | 5 | 0.3 |
7.00 | 95 | 5 | 0.3 |
质谱参考条件:
毛细管电压:3.5 kV;
二级锥孔电压:5 V;
射频透镜电压:0.5 V;
离子源温度:150 ℃;
脱溶剂气温度:500 ℃;
脱溶剂气流量:1000 L/hr;
锥孔气流量:50 L/hr;
碰撞室压力:3.2×10-3 mbar;
低质量端1分辨率:13.0;
高质量端1分辨率:13.0;
离子能量1:0.5 V;
碰撞室入口电压:-2 eV;
碰撞室出口电压:1 eV;
低质量端2分辨率:13.0;
高质量端2分辨率:13.0;
离子能量2:0.5 V;
光电倍增器电压:650 V;
碰撞气体:氩气;
数据采集模式:多反应监测。
在以上色谱、质谱条件下,5种禁用着色剂的定性离子对和保留时间见表4。
表4 5种禁用着色剂的定性离子对和保留时间
着色剂名称 | 定性离子对(m/z) | 保留时间(min) |
颜料橙5 | 339.2/156.2,339.2/128.2 | 2.56 |
酸性黄36 | 354.2/169.2,354.2/109.2 | 3.33 |
颜料红53:1 | 377.2/221.2,377.2/128.2 | 4.11 |
苏丹红Ⅳ | 381.4/128.2,381.4/106.2 | 5.40 |
苏丹红Ⅱ | 277.2/156.2,277.2/128.2 | 5.96 |
6 计算
w= ρV/m
式中:
w —— 样品中着色剂的质量分数,μg/g;
P —— 从标准曲线中得出的测试溶液中着色剂的质量浓度,μg/mL;
V —— 样品定容体积,mL;
m —— 样品取样量,g。
7 回收率和精密度
两个浓度水平中,低浓度的平均提取回收率和平均方法回收率在80%~120%之间,并且RSD小于10%(n=6);高浓度的平均提取回收率和平均方法回收率在85%~115%之间,并且RSD小于5%(n=6)。
8 色谱图
图1 5种禁用着色剂混合标准溶液(5 μg/mL)色谱图
1. 酸性黄36;2. 颜料红53:1;3. 颜料橙5;4. 苏丹红Ⅱ;5. 苏丹红Ⅳ