zhoujin83
第5楼2014/03/26
检查一下样品性质吧。楼主的样品估计是弱酸性,而且其pKa应该为6左右。所以之前楼主的稀释剂pH=4,样品完全不电离,同时流动相因为没有缓冲盐,所以pH变化不大,样品进入流动相后仍然呈分子状态,就能得到一个很好的峰;而将稀释剂pH调到6后,样品在这个pH下有两种状态,即分子态和离子态,并将这种状态保持到流动相中,所以出现了这样的峰形。另外,由于楼主的样品是弱酸性的,其保留随流动相pH的变化情况是,流动相pH增大,保留减小,流动相pH减小,保留增大。如上所述,楼主的流动相没有缓冲能力,稀释剂pH增大后,流动相pH也相应增大,所以样品保留减小了。
shanshunan
第6楼2014/03/26
谢谢的zhoujin83分析,样品性质确实如你所述,低pH值为分子态,升高pH值会逐渐向离子态变化。
再继续请教,我在升高pH值该如何进行HPLC方法条件的设置使之只出一个峰?或者在计算这种物质的峰面积时我能够把两个峰面积值加一下?谢谢!