检测米粉中VD2、VD3方法如何好
米粉等粉类食物是很多人热衷的食物,如酸辣粉、麻辣粉、米粉、米线、冷面、粉条、粉丝等。
维生素D2(VD2),又名麦角骨化醇,维生素D3(VD3),又名胆骨化醇,是维生素D的一组具有生物活性脂溶性类固醇衍生物。是某些食品、食物(如米粉)中为了提高动物生物体对某些钙元素的吸收,常添加的物质。
下面我们就介绍下米粉中VD2、VD3高效液相色谱法检测及针对实验效果对实验方法进行调整及优化。
色谱条件
检测器:紫外检测器
色谱柱:C18色谱柱
流速:1.0mL/min
检测波长:264 nm
流动相:甲醇
柱温:30℃进样量:20μL
样品前处理也倒简单这就不多说了。一般就是溶解、超声提取、离心提取、过滤、固相萃取、吹干、定容、微膜滤过等。
VD2、VD3标准品色谱图(各1.0mg/L):
米粉1样品色谱图: 米粉2样品色谱图: 这个条件VD2和VD3分离度有点差,得调整下色谱条件,优化下色谱峰形。 色谱条件中色谱柱、流速、流动相、柱温、进样量这些都可以调整,下面我们先换根色谱柱看看效果: VD2、VD3标准品色谱图(各1.0mg/L):
米粉1样品色谱图:
米粉2样品色谱图:
这根色谱柱柱效还不错,出峰时间不仅有所提前,分离度也好了不少,这根色谱柱很适合检测这个样品。 由于4.6mm内径的色谱柱最佳流速是1.0ml/min,流速这个条件我们就不做对比实验了(要想提高分离度,流速只能变小,因为流速越小出峰越晚,分离度就越好,但这样色谱峰形会变宽、变差,而对分离度起的作用也不会大)。 要想提高分离度,柱温就得降低,柱温降低了出峰就会变晚,分离度就会变好。由于一般实验室的柱温箱不带制冷功能,那我们就控个室温看看效果吧: VD2、VD3标准品色谱图(各1.0mg/L):
改变柱温后出峰时间稍微晚了点,分离度却没好了多少,显然在这不太实用(在有的样品检测中很实用)。 这个方法是反相色谱法,要想提高分离度,流动相有机含量就得降低,有机相降低了流动相极性就会变大,流动相极性变大了,洗脱能力就会降低,那样出峰就会晚,分离度就会好。那分别选个甲醇:水=90:10(V:V)和甲醇:水=80:20(V:V)看看效果吧: 甲醇:水=90:10(V:V)时,VD2、VD3标准品色谱图(各1.0mg/L):
甲醇:水=90:10(V:V)时,米粉1样品色谱图:
甲醇:水=80:20(V:V)时,VD2、VD3标准品色谱图(各1.0mg/L):
甲醇:水=80:20(V:V)时,米粉1样品色谱图:
改变这个条件出峰时间推迟的较明显,分离度也稍微好了点,但峰形也差了些,这种方法在这不太实用(在有的样品检测中很实用)。 要想提高分离度,色谱峰宽越小分离度就越好,半峰宽小,一是缩短检测时间,这种方法在这不合适(缩短检测时间分离度一般会变的更差);二是减小进样体积,减小进样体积色谱峰宽就会小,分离度就会好;如果色谱峰太低,可以再适当加大样品浓度。下面看看减小进样量效果: 10ul进样量时,VD2、VD3标准品色谱图(各1.0mg/L):
10ul进样量时,米粉1色谱图: 5ul进样量时,VD2、VD3标准品色谱图(各1.0mg/L):
5ul进样量时,米粉1色谱图:
显然这个方法也不错,分离度也较好。 总之在样品检测时如果分离度变化,我们应该有很多办法来解决,但效果最好的应该是选一根柱效更好,更适合做这个样品的色谱柱,其次我们可以适当调整流动相、适当调整柱温、适当调整进样量或样品浓度中一个或几个条件(在这个样品检测中首先的是更换色谱柱,其次是减少进样量效果好些)。 注意:由于每种样品的性质不同,调整每种色谱条件后的效果也可能大不相同,我们在实验时要具体问题具体分析、具体条件合理利用,切不可盲目行事。 以上内容是个人点小小见解,希望能对大家有用。最后最大家工作愉快、顺利,国庆快乐! |
花开见我
第7楼2014/09/29
和一个厂家的方法比较像。下面是链接
http://www.caigou.com.cn/News/Detail/133446.shtml