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求助 柱子冲洗

液相色谱(LC)

  • 悬赏金额:0积分状态:已解决
  • 各位高手好,我是小白,实验室刚买了waters UPLC H-Class,3月份做了几个 苯甲酸,槲皮素,阿魏酸,对羟基苯甲酸,流动相都是乙腈和水配比;做完后用乙腈灌注了。放了很久,这几天才有空照看设备,准备做卡马西平,流动相是甲醇:水=40:60;一开机跑了一下,发现压力好高啊!!12000PSI,流速一设高就报警了15000PSI报警;逐渐发现貌似柱子堵了,用纯甲醇充了一两个晚上都白搭;各位高手啊,求助改怎么冲柱子呢?有什么拯救的办法?

    软件里面的帮助说逐一接口排查,我排查了在线过滤器,把柱子换了双通管,压力就降下来了,几百个PSI,其他部位应该没有堵吧?另外其他部位如果排查的话,我不知道该怎么松螺丝?哪些螺丝可以松?开机状态松还是关闭所有电源后松?假期里,客服联系不上。求助大家了!多谢了!!
  • 该帖子已被版主-三人行加2积分,加2经验;加分理由:悬赏补贴
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  • 有水有渝

    第1楼2014/10/06

    应助达人

    如何是色谱柱堵了那只能近色谱柱或用90%乙腈低流速冲洗,只要没有完全堵死,慢慢应该会好很多。

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  • 夏天的雪

    第2楼2014/10/06

    应助达人

    换双通后压力下降明显,说明是色谱柱堵了造成的压力增加

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  • qingqingcao

    第3楼2014/10/06

    你打电话给我。你可以先站短给我,我给你电话。你电话联系我吧。首先是什么柱, 还有,流动相是否过滤了?

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  • 三人行

    第4楼2014/10/07

    色谱柱乙腈体系和甲醇体系的最好分开用。

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  • 夏天的雪

    第5楼2014/10/07

    应助达人

    请教一下:甲醇和乙腈体系的为什么要分开?一直混用的

    三人行(jncxyy2012) 发表:色谱柱乙腈体系和甲醇体系的最好分开用。

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  • fiyingwing

    第6楼2014/10/07

    条件不足,无法分析。
    怎么这么说呢:楼主一没给柱子型号,二没给流速,只是说了压力很高,怀疑“堵了”,但是12000psi的压力怎么来的没有说。

    我们这用UPLC的经验来看,(甲醇:水=40:60)>纯水>乙腈、水。

    甲醇和水混合后压力会有比较大的提升,等比例混合的时候压力最大,接近纯水的1.3倍,是纯乙腈的4倍以上。乙腈水混合的时候压力随着乙腈的比例提高而降低。

    再给个参考压力(放假凭记忆),一般说0.4ml/min流速50mm的纯乙腈压力是1000到2000psi之间,纯甲醇是2000到3000psi,纯水接近5000psi。如果是1:1的甲醇水,压力接近7000psi。
    如果放在100mm的柱子上,这个流速下用甲醇水会接近14000psi。用150mm的柱子,则会超过压力上限。

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  • enslyde

    第7楼2014/10/07

    柱子 是 C18柱,2.1*50mm;1.7微米;0.2ml 纯甲醇冲5-6Kpsi;0.2ml 纯乙腈冲 4-5K psi;0.2ml 40:60甲醇:水,8-9K psi;0.3ml 40:60 甲醇 水,压力再11000-12000psi;我测得卡马西平标液,用0.4ml流量的40:60=甲醇:水,压力很快就达15000psi上限,报警停机了。我洗脱了好几天,偶尔压力下来了,感觉低了1-2Kpsi,一上样品又崩溃了 压力立马飙升报警。不知道哪里出问题了。我初学液相,承蒙指点!

    fiyingwing(fiyingwing) 发表:条件不足,无法分析。
    怎么这么说呢:楼主一没给柱子型号,二没给流速,只是说了压力很高,怀疑“堵了”,但是12000psi的压力怎么来的没有说。

    我们这用UPLC的经验来看,(甲醇:水=40:60)>纯水>乙腈、水。

    甲醇和水混合后压力会有比较大的提升,等比例混合的时候压力最大,接近纯水的1.3倍,是纯乙腈的4倍以上。乙腈水混合的时候压力随着乙腈的比例提高而降低。

    再给个参考压力(放假凭记忆),一般说0.4ml/min流速50mm的纯乙腈压力是1000到2000psi之间,纯甲醇是2000到3000psi,纯水接近5000psi。如果是1:1的甲醇水,压力接近7000psi。
    如果放在100mm的柱子上,这个流速下用甲醇水会接近14000psi。用150mm的柱子,则会超过压力上限。

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  • 三人行

    第8楼2014/10/07

    以前有一款色谱柱,用完甲醇体系的流动相,再用乙腈水的流动相,色谱柱很快就报废了。

    夏天的雪(bingwang228) 发表:请教一下:甲醇和乙腈体系的为什么要分开?一直混用的

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  • fiyingwing

    第9楼2014/10/07

    把参数一说,问题就会比较明显了。

    柱子压力偏高了很多,而样品和流动相的过滤则可能是引起柱子堵的原因。

    上机样品和校准样应该是有用一次性注射器打过0.22滤膜吧?流动相尤其是含水含盐的流动相也是一定要抽滤的。不然柱子压力会越走越高,严重的流动相问题更可能会损坏仪器。

    具体可以参考UPLC H-class的操作规程,相信你会清晰很多。

    enslyde(enslyde) 发表:柱子 是 C18柱,2.1*50mm;1.7微米;0.2ml 纯甲醇冲5-6Kpsi;0.2ml 纯乙腈冲 4-5K psi;0.2ml 40:60甲醇:水,8-9K psi;0.3ml 40:60 甲醇 水,压力再11000-12000psi;我测得卡马西平标液,用0.4ml流量的40:60=甲醇:水,压力很快就达15000psi上限,报警停机了。我洗脱了好几天,偶尔压力下来了,感觉低了1-2Kpsi,一上样品又崩溃了 压力立马飙升报警。不知道哪里出问题了。我初学液相,承蒙指点!

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  • fiyingwing

    第10楼2014/10/07

    而对于目前的状况,在确定流动相和样品完全过滤以后,可以考虑换根新的色谱柱。并且时刻观察压力上升状况,防止同样状况发生。

    如果没有新柱子,把色谱柱反接用这种“最终绝招”我是“绝对”不会教你的。

    样品前处理是否有蛋白或者脂类的物质没沉淀掉也有影响。蛋白一般过0.22滤膜就过滤掉了(或者过滤不下去)。

    脂溶性杂质就比较麻烦,只有高比例甲醇或者乙腈才能冲掉。苯甲酸,卡马西平,都是强极性偏水溶性的药物,这些的流动相条件一般是冲不掉脂溶性杂质的,所以加入梯度洗脱,或者是每隔几个样品就加一针高比例的甲醇/乙腈冲洗10分钟会好很多。

    PS.W家UPLC的性能走梯度就很明显发挥出来了。添加剂多组分的梯度能在4-6分钟内走完。普通的HPLC系统一般要走10分钟以上。非广告,只是看最近坛子里“XX是骗局”的帖子有感。

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