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酶活力测定

  • rosmarinic
    2014/10/17
  • 私聊

食品添加剂

  • 酶活力的测定方法

    1)葡萄糖标准曲线的绘制

    8只洗净烘干的20 mL具塞刻度试管,编号后分别吸取0.0 mL ~ 1.4 mL葡萄糖标液用蒸馏水定容至2 mL,配置成一系列不同浓度的葡萄糖溶液。充分摇匀后,向各试管中加入1.5 mLDNS溶液,摇匀后沸水浴5 min,取出冷却后用蒸馏水定容至20 mL,充分混匀。在540 nm波长下,以1号试管溶液作为空白对照,调零点,测定其它各管溶液的吸光度值并记录结果。以葡萄糖含量为横坐标,以对应的吸光度值为纵坐标,绘制出葡萄糖标准曲线。

    2)滤纸酶活力的测定

    4支洗净烘干的20 mL具塞刻度试管,编号后各加入0.5 mL酶液和1.5 mL 0.05 mol/L pH 4.5的柠檬酸缓冲液,向1号试管中加入1.5 mL DNS溶液以钝化酶活性,作为空白对照,比色时调零用。将4支试管同时在50水浴中预热5 min ~ 10 min,再各加入滤纸条50 mg(定量滤纸,约1 cm × 6 cm),50水浴中保温1 h后取出立即向234号试管中各加入1.5 mL DNS溶液以终止酶反应,充分摇匀后沸水浴5 min,取出冷却后用蒸馏水定容至20 mL,充分混匀。以1号试管溶液为空白对照调零点,在540 nm波长下测定234号试管液的吸光度值并记录结果。

    根据3个重复吸光度的平均值,在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量,按下式计算出滤纸酶活力(U/g)。在上述条件下,每小时由底物生成1 μmol葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位(U)。



    式中:U—滤纸酶活力(U/g); M—葡萄糖含量(mg);

    V1—酶液定容总体积(mL); K5.561 mg葡萄糖的μmol数;

    V2—反应液中酶液加入量(mL); m—样品重(g);

    T—时间(h)。

    酶活力的测定结果

    1葡萄糖标准曲线的绘制

    采用分光光度计法,以葡萄糖在其最大吸收波长540 nm处绘制标准曲线,如图所示。




    求得葡萄糖的回归方程为:

    Y=0.7895X-0.0084 R2=0.9994



    葡萄糖含量在0.00 mg ~ 1.40 mg范围内呈线性关系。

    2酶活力的测定(滤纸法)

    根据上计算,滤纸法酶活力为5000 U/g,与酶制剂公司所提供酶活相一致
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    第1楼2014/10/17

    你测的是什么的酶活?

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  • rosmarinic

    第2楼2014/10/17

    纤维素酶

    原文由richies发表: 你测的是什么的酶活?

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  • symmacros

    第4楼2014/10/17

    应助达人

    请问DNS是什么?

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    第5楼2014/10/17

    应该是二硝基水杨酸吧

    symmacros(jimzhu) 发表:请问DNS是什么?

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    第6楼2014/10/17

    真没做过纤维素酶测定,好像是一类酶的总和吧

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  • rosmarinic

    第7楼2014/10/17

    [div]原文由richies发表:

    应该是二硝基水杨酸吧[/div]对的

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  • 花开见我

    第8楼2014/10/18

    其原理:

    纤维素酶水解纤维素,产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖,能将3,5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化合物,利用比色法测定其还原物生成量来表示酶的活力。

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  • rosmarinic

    第9楼2014/10/18

    感谢补充

    原文由cai008发表: 其原理:

    纤维素酶水解纤维素,产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖,能将3,5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化合物,利用比色法测定其还原物生成量来表示酶的活力。

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  • 夏天的雪

    第11楼2014/10/20

    应助达人

    引起酶活力降低的因素有哪些

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