HPLC 法测定白茅炭中siderin 的含量

wangshirf

2014/11/30

私聊

中药/天然药检测

HPLC法测定白茅炭中siderin的含量

白茅根为禾本科植物白茅(Imperatacylindrica Beauv. var. major(Nees) C. E.Hubb.)的干燥根茎^[1]，春秋二季采挖,洗净,晒干,除去须根及膜质叶鞘,捆成小把。白茅根始载于《神农本草经》，列为中品，其炮制始载于晋代《肘后备急方》。本品性味甘寒,具有凉血止血、清热利尿之功,临床常用于治疗吐血淋病、小便不利、急性肾炎、水肿和黄疸等。因其疗效显著,深受历代医家喜爱。在前期的研究过程中，我们已经确定了乙酸乙酯部位为其有效部位，且从该部位中分离得到了具有生理活性的成分Siderin,故我们拟以该指标对炭品进行质量控制。

摘要： 目的建立白茅炭中siderin含量测定方法。方法液相色谱法。色谱柱：Kromasil C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（45：555）；流速1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：283nm。结果： siderin在9.25～92.5μg范围内呈线性关系（r=0.9999 ,n=6），线性方程为y=40745238x-64452.6(r=0.9999)。平均加样回收率为97.51% RSD为2.65% （n=6）结论该方法操作简便，结果可靠，可用于白茅炭中siderin的含量测定。
关键词：高效液相色谱法；白茅炭；siderin
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-M20A检测器， LCsolution色谱工作站， Metteler AB265S（0.01mg）；Sartorius BS124S（0.1mg）
1.2 试药 siderin（经归一化法纯度检查，含量》98%。甲醇为色谱纯，水为纯化水。白茅炭为自制，批号：20140629 20141102 20140216

2.1测定方法

采用高效液相色谱法

2.2色谱条件

色谱柱：Kromosil C₁₈(5mm,4.6×150mm)，流动相：甲醇-水^[2]（45:55）为，检测波长为306nm，流速1.0ml∕min，柱温30℃。

2.3供试品溶液的制备

取样品粉末（过60目筛）2g,精密称定，置索式提取器中，精密加入50ml乙酸乙酯，95℃提取4h，回收溶液至干，残渣用甲醇溶解，定容于5ml量瓶中，摇匀，滤过即得。

2.4线性关系的考察

取对照品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，得1.032mg/ml的溶液作为对照品储备液。精密量取5ml稀释至50ml。再分别取1ml,2ml,4ml,6ml,8ml至10ml量瓶中分别得到0.010320mg/ml,0.02064mg/ml,0.04128mg/ml,0.06192mg/ml,0.08256mg/ml的对照品液，按照上述色谱条件分别进样10ml，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，以Siderin的浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程即得y=40745238x-64452.6(r=0.9999)。

表4－25 Siderin的线性关系考察

Table 4-25 the linear relation of the standard curve

序号	浓度（mg/ml）	峰面积平均值
1	0.01032	382187
2	0.02064	752045
3	0.04128	1608015
4	0.06192	2459416
5	0.08256	3306382

2.5精密度实验

取3号对照品溶液10 ml,重复进样6次,测定,结果见表4-26。RSD为0.49％，表明本方法精密度良好。

表4-26精密度考察

Table4-26 he investigation of accuracy

次数	峰面积	RSD（％）
1	1608015	0.49％
2	1627159
3	1611238
4	1609561
5	1623487
6	1617245

2.6重复性试验

取3号样品6份，依法测定，结果见表4-27，复性结果表明，3号样品中的Siderin平均含量为76.49，RSD为0.67%。

表4－27 重复性试验结果

Table 4-27 the investigationof reproducibility

序号	取样量(g)	平均峰面积	含量（mg/g）	平均含量（mg/g）	RSD（%）
1	1.9991	1184214	76.65	76.49	0.67
2	2.0006	1193549	76.55
3	2.0003	1189624	76.32
4	2.0009	1180329	76.34
5	1.9996	1173546	75.36
6	1.9998	1172508	75.90

2.7样品稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、8、12、24、48h在上述色谱条件下进样分析。Siderin的RSD为0.85%，结果表明供试品溶液在48h内稳定。

表4－28 稳定性考察

Table 4-28 the investigation of stablity

序号	时间（h）	峰面积
1	0	1184214
2	2	1188356
3	8	1162350
4	12	1166875
5	24	1173564
6	48	1178641

2.8加样回收率试验

取3号药材粉末6份，每份约2g，精密称定，分别精密加入Siderin溶液（0.1032mg/ml）1.5ml，按照3.2项下操作，配制成6份加样的供试品溶液，在上述色谱条件进样分析，计算回收率。见表4－29。

表4-29加样回收率考察

Table 4.29 the investigation of recovery

样品量（g）	Siderin含量（mg）	加标量（mg）	测得量（mg）	回收率(%)	平均回收率（%）	RSD(%)
1.9994	152.90	154.8	311.92	101.37	97.51	2.65
2.0005	153.02	154.8	288.80	93.82
2.0002	153.00	154.8	303.61	98.64
2.0008	153.04	154.8	302.33	98.21
1.9993	152.93	154.8	300.56	97.67
1.9998	152.96	154.8	293.36	95.32