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待测样品的pI值未知,该如何选择缓冲液?

毛细管电泳(CE)

  • 各位大神好,我的待测样品为病毒的两种不同颗粒,样品已经过CsCl纯化,但是病毒颗粒的pI值未知,我应该如何挑选缓冲液?目前的做法是机械式地从pH2.5磷酸盐到pH9.3硼酸盐都试了一遍,但是效果都不是很理想,希望各位大神能给点建议。
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  • 淋淋雨

    第1楼2015/01/06

    从文献中查到采用的缓冲液为pH8.0的eCAP chiral high pH的缓冲液,但我无论从哪都没找到这种缓冲液的信息,不知道有没有大神能提供点线索?

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  • nini2006

    第3楼2015/01/06

    没接触过这方面,没经验,不过因为病毒是由一个核酸分子和蛋白质构成(或仅由蛋白质构成),所以估计用CZE分离的话吸附会很严重,考虑用涂层毛细管和别的分离模式吧。

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  • CEcret

    第4楼2015/01/06

    严重同意,吸附是需要解决的首要问题。可以采用商品化的涂层管或者动态涂层技术来解决这个问题。Beckman的这个buffer其实是简单的50mM Tris-HCl buffer,pH 8.0,可以自己配的。其中不包括涂层技术。你可以尝试一下看看你的病毒颗粒吸附的程度是否严重。

    nini2006(nini2006) 发表:没接触过这方面,没经验,不过因为病毒是由一个核酸分子和蛋白质构成(或仅由蛋白质构成),所以估计用CZE分离的话吸附会很严重,考虑用涂层毛细管和别的分离模式吧。

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  • 淋淋雨

    第5楼2015/01/06

    好的,谢谢您!您说的涂层毛细管是PVA涂层吗?我看安捷伦的产品目录只有这个涂层的毛细管。除了涂层毛细管以外,还有其他方法解决这个问题吗?

    CEcret(v2812644) 发表:严重同意,吸附是需要解决的首要问题。可以采用商品化的涂层管或者动态涂层技术来解决这个问题。Beckman的这个buffer其实是简单的50mM Tris-HCl buffer,pH 8.0,可以自己配的。其中不包括涂层技术。你可以尝试一下看看你的病毒颗粒吸附的程度是否严重。

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  • 淋淋雨

    第6楼2015/01/06

    谢谢您!您说的涂层毛细管是PVA涂层吗?另外,除了涂层毛细管以外,还有其他方法解决吸附的问题吗?

    nini2006(nini2006) 发表:没接触过这方面,没经验,不过因为病毒是由一个核酸分子和蛋白质构成(或仅由蛋白质构成),所以估计用CZE分离的话吸附会很严重,考虑用涂层毛细管和别的分离模式吧。

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  • nini2006

    第7楼2015/01/06

    除了涂层毛细管,还可以用动态涂层的方式,除此之外还可以用极端pH值法等等,抑制吸附有很多方法,你可以借鉴蛋白质的分离方法。

    淋淋雨(v2794111) 发表:好的,谢谢您!您说的涂层毛细管是PVA涂层吗?我看安捷伦的产品目录只有这个涂层的毛细管。除了涂层毛细管以外,还有其他方法解决这个问题吗?

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  • 淋淋雨

    第8楼2015/01/06

    我查到的几篇和我做的相同样品的文献里都用的未涂层毛细管,只是加入SDS或者腐胺作为改性剂,不知道这对解决吸附有没有帮助?

    nini2006(nini2006) 发表:除了涂层毛细管,还可以用动态涂层的方式,除此之外还可以用极端pH值法等等,抑制吸附有很多方法,你可以借鉴蛋白质的分离方法。

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  • nini2006

    第9楼2015/01/06

    有SDS就是MEKC模式,蛋白质的分离,MEKC还是很常见的。纸上谈兵没用的,也没人敢给你打包票,多动手试试看吧,总有一种方式适用的。

    淋淋雨(v2794111) 发表:我查到的几篇和我做的相同样品的文献里都用的未涂层毛细管,只是加入SDS或者腐胺作为改性剂,不知道这对解决吸附有没有帮助?

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  • CEcret

    第10楼2015/01/07

    给你发站内短信了。

    除了涂层管,还可以采用动态涂层试剂。

    淋淋雨(v2794111) 发表:好的,谢谢您!您说的涂层毛细管是PVA涂层吗?我看安捷伦的产品目录只有这个涂层的毛细管。除了涂层毛细管以外,还有其他方法解决这个问题吗?

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