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保留时间漂移

  • 长江七号
    2015/04/23
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 这两天遇到个怪事,
    流动相为甲醇:水=90:10,流速0.4mL/min,柱温为35℃,连续6针的标样出峰时间为1.58min
    将C18色谱柱换到同型号另一台液相上,相同的流速、流动相和柱温,连续6针的样出峰时间为0.78min
    怀疑流速不准,检查了下泵A和泵B的实际流速,均与设定值一致。
    将流动相改为100%甲醇,流速和柱温不变,连续6针的标样出峰时间为1.28min
    这个现象比较奇怪,理论上纯有机相洗脱出峰时间应提前,现在反而延迟0.5min。
    难道是泵后的混合器有问题导致两泵流动相混合后出现了一些奇怪的变化?
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  • 一片枫叶

    第2楼2015/04/23

    应助达人

    被测物的极性可能相对较大,100%的甲醇比90%的甲醇极性较弱,洗脱非极性及弱极性被测物的能力较强,而对于极性较强的被测物,其洗脱能力就相对较弱了,所以,纯甲醇反而会延迟极性较大的被测物的出峰时间。本人的见解,不一定正确,只作参考。

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  • jsdengxiao

    第3楼2015/04/24

    第一个问题,更换仪器所有条件都一样,那就是一起问题了,你是用的在线混合的吗,你试下自己配好的9:1的试剂单通道跑跑看,是HPLC吗,这个出峰有点快啊,感觉没保留,可以改下比例,没保留的时候进样量太大、样品溶解不合适都会有保留时间飘;第二个问题C18柱有机相比例增大肯定洗脱更快的,包括极性的物质,如果9:1时1.58min,100%甲醇1.28min,这个就合理了,混合阀的可能性大

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  • 长江七号

    第4楼2015/04/24

    用的是2.1mm内径的色谱柱,填料还是5um

    老多_小多(emoc98311) 发表:快速液相吗,出峰这么快

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  • 长江七号

    第5楼2015/04/24

    是泵后在线混合的,今天试了把两个泵都换成甲醇,冲洗了很长时间以后,然后两泵混合等度洗脱,不管A泵和B泵换成多少比例,都与单泵纯甲醇的保留时间1.29min是一致的。
    最后再将A泵换回超纯水,试了下90%甲醇+10%水,连续6针的保留时间都保持在1.50min,这个时间从理论上来说就比较合理了。
    因此判断可能是A泵或者混合器部分的管路有污染导致两泵混合不均匀,必须用有机相冲洗才能排除污染。

    jsdengxiao(jsdengxiao) 发表:第一个问题,更换仪器所有条件都一样,那就是一起问题了,你是用的在线混合的吗,你试下自己配好的9:1的试剂单通道跑跑看,是HPLC吗,这个出峰有点快啊,感觉没保留,可以改下比例,没保留的时候进样量太大、样品溶解不合适都会有保留时间飘;第二个问题C18柱有机相比例增大肯定洗脱更快的,包括极性的物质,如果9:1时1.58min,100%甲醇1.28min,这个就合理了,混合阀的可能性大

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  • 浪淘沙隐

    第6楼2015/04/24

    这个保留太弱了,根本不好判断,把流动相中的甲醇减小比例再说吧。

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  • 武灵

    第7楼2015/04/24

    你9:1的 柱压能到多少?多长柱子啊?

    长江七号(nedved33) 发表: 用的是2.1mm内径的色谱柱,填料还是5um

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  • 长江七号

    第8楼2015/04/25

    150mm*2.1mm*5um的C18柱子
    0.4mL/min的流速,柱温35℃,柱压84bar左右

    武灵(zhonghuashendun) 发表:你9:1的 柱压能到多少?多长柱子啊?

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  • 武灵

    第9楼2015/04/26

    哦,谢谢。

    长江七号(nedved33) 发表: 150mm*2.1mm*5um的C18柱子
    0.4mL/min的流速,柱温35℃,柱压84bar左右

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  • 夏天的雪

    第10楼2015/04/26

    应助达人

    这么短的时间出峰,保留太弱,仪器、色谱柱即使完全相同,管路长度、连接也会有差别,稍微有些差别应该是正常的。前面保留时间为0.78min,也怀疑是泵或者在线混合器受污染引起的

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