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酸性蛋白CIEF分析

毛细管电泳(CE)

  • 最近在做几个酸性蛋白的CIEF。贝克曼的方法比较适用于中性和偏碱性的蛋白分析,对于酸性蛋白分析效果不太理想。氨水迁移法比较适合酸性蛋白,但是据说很伤柱子,做不了几个样品。讨论一下,有没有人遇到同样的问题,是怎么优化方法的呢?我尝试调整占位剂的配比,暂时也没有得到理想的结果。
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  • ericwong

    第1楼2015/06/30

    没有做过这方面的东西。
    没查到类似的文献吗?

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  • lingyou

    第2楼2015/07/01

    你是来消灭零回帖的吗~~一直在查,没有找到合适的方法

    ericwong(ericwong) 发表:没有做过这方面的东西。
    没查到类似的文献吗?

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  • CEcret

    第3楼2015/07/01

    你考察过氨水迁移法的耐久性么

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  • lingyou

    第4楼2015/07/01

    没有。第一次走了大概8个样品,隔两天再走图谱就不对劲了。询问了一下工程师,他说大概五针左右。我感觉没有这么脆弱,但是柱子确实状态不行了,就换了一根,没有再试这种方法。
    你们有没有做过pI<4的酸性蛋白,有什么好的优化思路吗?据说醋酸法不太适用于pI<4的情况。我加大IDA的量,不加Arg结果样品根本没有峰。这是什么原因呢?

    CEcret(v2812644) 发表:你考察过氨水迁移法的耐久性么

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  • ericwong

    第5楼2015/07/01

    呵呵,搂草打兔子而已。
    做的越具体,做过的人越少。你也提到过没有什么文献,那么只有两个可能,一个是还没有多少人做,如果是这样的话,就可以偷笑了;另一个是这个不容易做,做过的没有什么好的结果,因此没有多少文献。
    既然这样,那就只有自己多努力了。试着从原理上下功夫,看看有没有解决办法;另外就是要多选体系去试验。

    lingyou(v2983592) 发表: 你是来消灭零回帖的吗~~一直在查,没有找到合适的方法

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  • CEcret

    第6楼2015/07/03

    这位女士是来自生物制药企的,对发文章不感兴趣的。所以要是没有什么人做的话,绝对是笑不出来的。好在做过这个品种的人也有一些的

    ericwong(ericwong) 发表: 呵呵,搂草打兔子而已。
    做的越具体,做过的人越少。你也提到过没有什么文献,那么只有两个可能,一个是还没有多少人做,如果是这样的话,就可以偷笑了;另一个是这个不容易做,做过的没有什么好的结果,因此没有多少文献。
    既然这样,那就只有自己多努力了。试着从原理上下功夫,看看有没有解决办法;另外就是要多选体系去试验。

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  • lingyou

    第7楼2015/07/06

    我觉得是后者啦。主要还是经验不足,需要多加试验

    ericwong(ericwong) 发表: 呵呵,搂草打兔子而已。
    做的越具体,做过的人越少。你也提到过没有什么文献,那么只有两个可能,一个是还没有多少人做,如果是这样的话,就可以偷笑了;另一个是这个不容易做,做过的没有什么好的结果,因此没有多少文献。
    既然这样,那就只有自己多努力了。试着从原理上下功夫,看看有没有解决办法;另外就是要多选体系去试验。

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  • nini2006

    第8楼2015/07/06

    差矣, Eric可是本版资深专家,你提供的信息越详细越有利于网友帮助你分析和解决问题。

    lingyou(v2983592) 发表: 你是来消灭零回帖的吗~~一直在查,没有找到合适的方法

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  • CEcret

    第9楼2015/07/08

    唉,你自己摸索也是挺辛苦的,也不知道你们老板怎么想的。
    我可以告诉你几点:
    1。选择合适的窄范围两性电解质
    2。氨水迁移法,耐久性还是可以的
    3。尿素浓度会影响蛋白的亚基,需要优化。

    我们曾经投入不少的精力做过相关的考察,但是我只能帮你这些了。

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  • lingyou

    第10楼2015/07/09

    如果你们开发一个方法的话,大概多少钱呢?最近有没有关于方法优化的培训啊

    CEcret(v2812644) 发表:唉,你自己摸索也是挺辛苦的,也不知道你们老板怎么想的。
    我可以告诉你几点:
    1。选择合适的窄范围两性电解质
    2。氨水迁移法,耐久性还是可以的
    3。尿素浓度会影响蛋白的亚基,需要优化。

    我们曾经投入不少的精力做过相关的考察,但是我只能帮你这些了。

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