GPC做校准曲线，不同分子量的标样出峰的时间基本一致？？求大神解答

你好，新手版浏览量较少，转到GPC版了。
下次发帖记得到对应版面，以便坛友们尽早看到。

应助达人

看了下你的图，2M的样品出峰时间应该是15分钟的那个，140K的是17分时的，20分钟的是溶剂峰，但看谱图，你的样品溶解得不是很好，最好用流动相来溶解样品。
还有你用的是什么柱子，分离范围是多少的？

期待答案

我们的标准品是直接购买北京龙智达的 聚苯乙烯硫酸酯钠盐 ，他们是直接配好的溶液。我们用的柱子是昭和的 shodex SB 806HQ 8mm*300mm 理论塔板数12000以上的

应助达人

聚苯乙烯硫酸酯钠盐 是溶解在什么体系的？你使用的流动相有是什么呢？
OHpak SB系列柱是一种GPC柱，适合分析水溶性高分子和测定聚合物的分子量分布，其填料为聚羟甲基丙烯酸酯凝胶，可以允许在很宽的范围内（如碱性条件）灵活地选择流动相。shodex SB 806HQ 8mm理论排阻限为20000000。药典推荐的流动相：含0.05%叠氮化钠的1mM/LPBS(PH7.0);或者0.05mol/L 磷酸盐缓冲液，PH6.8

谢谢您的详细解答。这个出峰与进样量多少有关系吗？实验方法上是进样100ul，我们定量环是20ul的，按照进样量是3-5倍定量环的原理，我用100ul的针进的样(确保每次进样量一样准确）。试验方法如下，标样卖家提供的。
取透明质酸5mg，加流动相至50ml，摇匀，室温放置过夜，作为供试品溶液。另取4～5个已知分子量范围1万～500万的聚苯乙烯硫酸酯钠盐对照品，同法制成每1ml中约含0.1mg的溶液作为系列对照品溶液。照分子排阻色谱法（中国药典2010年版二部附录V H），用多糖测定用凝胶柱Shodex SB-806HQ（8.0mm×300mm）或两根柱串联，以0.2mol/L氯化钠溶液（取氯化钠11.9g，叠氮化钠0.1g，加纯水使溶解并稀释至1000ml）为流动相，柱温35℃，流速为每分钟0.5ml，示差折光检测器。
取上述各对照品溶液100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，由GPC软件进行普适校正计算线性回归方程，

你可能没有把图放大，所以只看到溶剂峰了，小不懂可能把图放大了，看到了标样和样品的色谱峰，另外，你应该是一根柱子吧，可能20ul进样量少了一点，信号太低。

学习了大神们的回复，受益匪浅！

应助达人

定量环是20微升的，你就是进1000微升也只有20微升进了仪器，可能是这个原因信号低，这样品浓度还能提高吗？若不改变进样体积就只能增加进样浓度了，但我们在做分析时是降低浓度，增大进样体积的。一般高分子的溶解度不是很大，就算看着好像溶解了，但也不是真溶液。还有在数据处理时，你可以把20min以后的色谱不看，这样就能看到样品的信号了。