生姜中涕灭威及其代谢物检测固相萃取方法

逗点生物

2015/07/16

私聊

液质联用（LCMS）

生姜中涕灭威及其代谢物检测固相萃取方法

一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为生姜样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
三种涕灭威及其代谢物标准品：涕灭威(CSA:116-06-03)，涕灭威砜(CSA:1646-88-4)，涕灭威亚砜(CSA:1646-87-3)。
三、应用范围
本方法适用于生姜、大米、花生等样品中涕灭威、涕灭威砜及涕灭威亚砜LC-MS/MS检测及确证。
四、参考标准
进出口行业标准《SN/T 2441-2010 进出口食品中涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法》。
五、实验材料
Biocomma® NH2 固相萃取柱 3mL/500mg。
六、实验方法
1、样品提取
称取5.0g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入20ｍL乙腈，均质2min，振荡提取20min，上清液过无水硫酸钠收集到分液漏斗中，残渣再加入20mL乙腈，重复上述操作一次，合并2次滤液，加入20mL用乙腈饱和的正己烷，振荡10min，静置分层，弃去正己烷层，乙腈层于40℃下旋转蒸发浓缩至干，用2mL甲醇-二氯甲烷（1：99，体积比）溶解，待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：加入5mL甲醇-二氯甲烷（1：99，体积比）活化，弃去流出液。
(2)上样：加入待净化液，流速控制在1 mL/min内，收集流出液。
(3)洗脱：用5mL甲醇-二氯甲烷（1：99，体积比）洗脱，接收流出液，并重复一次，合并步骤(2)、(3)流出液。
(4)浓缩定容：40 ℃缓慢氮气流条件下吹至近干(约0.5 mL)后挥干，用1.0mL乙腈-0.1％甲酸水溶液（10：90，体积比）定容容至1 mL，过0.45μm微孔滤膜，上LC-MS/MS，待测定。
3、LC-MS/MS条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1×150mm，5μm，100Å）
质谱仪：API 4000
A:乙腈溶液；B:0.05%甲酸的水溶液

进样量：5μL
柱温：30℃
流速：0.3 mL/min
离子源：电喷雾（ESI），正离子模式
检测方式：多反应监测（MRM）

七、实验结果
1、生姜基质10μg/kg加标回收结果：
三个平行测试样的平均回收率均大于80%，平行样间相对标准偏差均小于5%，符合标准要求。（见表4）

2、空白样品中添加涕灭威及其代谢物色谱图

本研究是逗点生物利用固相萃取法作为生姜样品的前处理方法，以进出口行业标准《SN/T 2441-2010 进出口食品中涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法》制定，适用于生姜、大米、花生等样品中涕灭威、涕灭威砜及涕灭威亚砜LC-MS/MS检测及确证。欢迎广大色谱分析者参考。