叶绿素a的测定

深海的天空

2015/08/26

私聊

分子荧光光谱

叶绿素a存在于一切独立营养植物中，是一种能将光合作用的光能传递给化学反应系统的惟一色素。因此，叶绿素a就成为水中有机物的源泉。通过测
定叶绿素a，可以了解海洋、湖泊和河流中植物性浮游生物的现存量和基础生产量，可掌握水体中藻类现存量。因此，叶绿素a指标是评价水体富营养化程度最直接有效的方法，也是目前科学地预测其发展趋势的有效方法。根据实测资料分析，当叶绿素a含量从常量上升至10 mg／m³以上，并有迅速增加的趋势，就可预测水体即将发生富营养化。
(一)叶绿素a的分光光度法测定
在一定量的水样中添加1％碳酸镁悬浮液1 mL，充分搅匀，用玻璃纤维滤纸或微孔滤膜过滤。若不能立即提取，将带样品的滤膜放人冰箱保存(1～2 d)。将载有藻类的滤膜放人研钵中，加入90％丙酮6～7 mL，研磨至呈糊状，再用90％丙酮溶液洗入具塞刻度离心管中，密封，放置暗处静置萃取6～20 h。以3500～4000r／min转速离心lO～15 min，取上清液转入1 cm比色皿中，以90％丙酮溶液为参此，于波长665 nm和750 nm处测吸光度，然后加入几滴l mol／L盐酸酸化，于波长665 nm和750 nm处再测吸光值。叶绿素a浓度计算公式为：

Chla=27．3×[(E₆₆₅一E₇₅₀)一(A₆₆₅一A₇₅₀)]×V_丙酮／V_水样
式中：Chla——叶绿素a含量(μg／L)；
E₆₆₅,E₇₅₀——丙酮萃取液分别于波长665 nm和750 nm的吸光度；
A₆₆₅,A₇₅₀——丙酮萃取液酸化后分别于波K 665 nm和750 nm的吸光度；
V_丙酮——丙酮萃取液的体积，mL；
V_水样——水样过滤的体积，L。
(二)叶绿素a的荧光法测定
适合于藻类较少的贫营养湖泊或外海洋中的叶绿素a的测定。基本原理是，当丙酮提取液经紫外线照射时，叶绿素a显现其固有的红色荧光特征，其浓
度与荧光强度存在一定的规律性，因此可定量测定叶绿素a的含量。由于所用的光源强度高，故荧光法的灵敏度比分光光度法约高两个数量级。

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