人凝血因子VIII中氨基酸含量测定

3 溶液制备
3. 1 Eluent( 醋酸盐－ 磷酸盐缓冲液) 稀释液称取三水乙酸钠190. 4 g，加注射用水1000 mL，搅拌，溶解，用稀磷酸将pH 调至5. 2，加入乙二胺四乙酸二钠溶液( 称取乙二胺四乙酸二钠100 mg，加注射用水100 mL，摇匀使其溶解) 10 mL，加入叠氮化钠0. 1 g 及三乙胺23. 7 mL( 17. 2 g) ，用稀磷酸滴定至pH 4. 95，用0. 45 μm 的滤膜过滤，于4 ℃储存，备用( 此条件下可保存6 个月) 。量取该溶液100 mL，加注射用水稀释至1000 mL，混匀，即得Eluent( 醋酸盐－ 磷酸盐缓冲液) 稀释液。
3. 2 对照品储备液混合对照品储备液精密称取各氨基酸对照品适量，置同一100 mL量瓶中，以注射用水溶解并定容至刻度。制成含氨基酸含量均含5. 0 mg·mL － 1 的混合对照品溶液，即得。
单个对照品储备液: 精密称取各含氨基酸的各对照品适量，分别置100mL 量瓶中，用注射用水溶解并定容至刻度。制成分别含各氨基酸的单个对照品溶液，即得。
3. 3 供试品储备液
3. 3. 1 加样回收率试验溶液精密称取各氨基酸各0. 3200，0. 4000，0. 4800 g 和辅料适量，加人凝血因子VIII原液7. 5 mL，肝素钠适量，用1. 0 mol·L － 1 盐酸调pH 至6. 9，加0. 01 mol·L － 1枸橼酸三钠溶液溶解并定容于20 mL。分别制备成16. 0， 20. 0， 24. 0 mg·mL － 1溶液。
3. 3. 2 空白溶液 按公司处方，加入辅料的混合物，用注射用水制备各空白溶液
3. 4 内标溶液精密称取α － 氨基丁酸( AABA)0. 4 g，加注射用水定容至100 mL。
4 氨基酸衍生方法
4. 1 精密量取供试品储备液、样品及对照品储备液各1. 0 mL，加1. 5%磺基水杨酸9. 0 mL，混匀静置2 h以上， 3000 r·min － 1离心10 min，留取上清液。
4. 2 精密量取“4. 1”项下上清液1. 0 mL( 其中对照品储备液对应上清液分别精密量取0. 06， 0. 4，0. 8，1. 0， 1. 2， 1. 6 mL) ，分别置10 mL 量瓶中，用注射用水定容。制备成供试品溶液、样品溶液及浓度分别为1. 5， 10. 0， 20. 0， 25. 0， 30. 0，40. 0 mg·mL － 1 的对照品溶液。
4. 3 精密量取“4. 2”项下溶液各100 μL，分别加注射用水0. 4 mL 及内标溶液20 μL，混匀备用。
4. 4 精密量取“4. 3”项下溶液30 μL 放入衍生管中，加硼酸缓冲液( pH 8 ～ 10) 210 μL 涡旋混合，并加入AQC 衍生剂60 μL 涡旋混合15 s，即为各供试品溶液，待用。

怎么这么奇怪，明明是我发的帖子，怎么变成“微雨燕双飞”的帖子了

人凝血酶原复合物，在20min左右有峰甘氨酸标准磺基水杨酸+a氨基丁酸
盐酸精氨酸标准盐酸赖氨酸标准
脯氨酸标准组氨酸标准（含有脯氨酸杂质，并且组氨酸峰和甘氨酸峰重合）
空白溶液
混合标准（本来应该有6中峰，但由于甘氨酸和组氨酸峰重合，只有5个峰，15min，20min，22min，23min，24min）。15min峰是甘氨酸和组氨酸的合并峰。
人凝血因子VIII（制剂只有组氨酸）

5 方法与结果
5. 1 色谱系统的适用性评价和氨基酸的定性鉴别
对混合对照品溶液、单个对照品溶液、空白溶液进行衍生处理后，分别进样，记录色谱图。比较得到各氨基酸对应的峰位。除甘氨酸和组氨酸峰重合不能区分外，其余均可以有效分离。
5. 2 本方法下，对各标准的回收率进行测试，，回收率为98. 7% ～ 101. 5%。RSD 均小于1. 5%（具体的数据就不上了）。有较好的应用性，且线性良好，r值均大于0.9990.
5.3 如果辅料中同时混有甘氨酸和组氨酸，则本实验将无法进行准确定量。故有一定的局限性。

应助达人

这个人凝血因子已经被青林吃透透了吧。

我也只负责一部分而已
这个方法还要改，甘氨酸和组氨酸没分开

为毛要用这么复杂的方法，又是醋酸盐，又是磷酸盐，又是三乙胺，还有叠氮化钠和EDTA，流动相也用了3相

实验都还没有完善的呢？

这是结合药典的方法，主要是一些氨基酸的峰不好分离

浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:为毛要用这么复杂的方法，又是醋酸盐，又是磷酸盐，又是三乙胺，还有叠氮化钠和EDTA，流动相也用了3相