目的：为了真实反映检验结果的精确度，评定大肠菌群的不确定度。方法：分析食品中大肠菌群检验结果的不确定度的来源，计算检验结果的不确定度。结果：本次实验中的扩展不确定度为5.8%，采用此方法适合于大肠菌群检验结果的评定。结论：重复检验样本中大肠菌群进行不确定度评定的方法较科学，其方法适合于同类样品检验中大肠菌群的不确定度评定。
大肠菌群：不确定度
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，所检测的结果是判定食品优劣的依据。在CNAS-CL07：2006《测量不确定度评估和报告通用要求》中规定检测实验室应有能力对每一项有数值要求的测量结果进行测量不确定度评估。本文介绍的是按GB/T4789.3-2003《食品卫生微生物学检验》对同一份冷饮中大肠菌群检测10次的结果作不确定度的评定。
1 原理和方法
1.1检测原理
样品经乳糖胆盐发酵管培养阳性、伊红美蓝琼脂平板培养、革兰染色、镜检观察和经乳糖管培养。凡乳糖管产气、革兰染色阴性的无芽胞杆菌，即为大肠菌群阳性。
1.2检测方法
依据GB/T4789.3-2003《食品卫生微生物学检验员大肠菌群测定》以无菌操作取均匀后检样25ml来菌生理盐水的灭菌三角烧瓶中，经充分振摇做成1：10的均匀稀释样液。用灭菌盐水作为稀释，根据食品卫生标准要求和对榈污染情况的判断，选择10、1、.01ml3个稀释度，每个稀释度接种3管，放置36℃±1℃恒温箱内培养24±2h。取出观察，将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃恒温箱内培养24±2h。然后取出观察菌落形态，并做革兰染色和证实试验及接种乳糖发酵管，置36℃±1℃恒温箱内培养24±2h。凡是乳糖管产气、革兰染色阴性的无芽胞杆菌，判定该管为大肠菌群阳性。根据大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，乘以稀释倍数，报告每100 ml样品中大肠菌群的MPN值。经实验室对一定的培养基、培养温度、培养时间进行严格的测试后进行不确定度的评定检测。对某冷饮均质后重复10次检测大肠菌群的数据进行不确定度评定。
2分析不确定度的来源
不确定度的来源见图1。
图1不确定度来源及因果关系图
3 建立数学模型
A=
式中：
A－样品中大肠菌群数，MPN/100 ml
V1－取样体积，ml
V2－稀释用生理盐水体积，ml
X－稀释液中大肠菌群含量，MPN/100 ml
4 不确定度分量评定
4.1取样体积V1引起的不确定度
在样品稀释过程中，用10 ml刻度吸管吸取3次，共吸取样品25 ml。根据校准规程10 ml刻度吸管允许差为±0.05，按均匀分布，其标准不确定度为0.05/=0.0289ml，由于在吸取25ml样品过程中使用了3次10ml吸管，因此得到的吸管引入的标准不确定度为。在实验室室温为30℃时取样，水的膨胀系数为 ，按均匀分布温度引入的标准不确定度为ml。
因此取样体积引入的标准不确定度为 ml
取样体积引入的相对标准不确定度为
4.2 样品稀释后的体积（V1＋V2）引起的不确定度
由4.1可知UC（V1）＝0.05856 ml，在稀释过程中，用250 ml量筒量取生理盐水一次，根据校准250 ml规程量筒的允许差为±2.0ml，按均匀分布，其标准不确定度为2.0/＝1.155ml。
在实验室室温为30℃时取样，水的膨胀系数为℃，按均匀分布温度引入的标准不确定度为 ml。
因此稀释后的体积引入的标准不确定度为
相对标准不确定度为
4.3 重复性检测引入的不确定度
重复性检测引入的不确定度，主要是检测过程中随机性所得发酵管的阳性个数分布不一样所引起，采用统计学方法进行不确定度的评定，对样品稀释液重复10次的大肠菌群的含量见表1。
大肠菌群的生长繁殖是以几何级数递增的，所得数据的发散性较大，因此在评定大肠菌群不确定度是时，应用贝塞尔公式计算其对数的平均值和标准偏差。用统计学求结果对数的均值和标准差见表2。
表1 样品稀释液检测10次的大肠菌群含量（MPN/100ml）
编号 | 阳性管数 |
X |
| 10 ml×3 1 ml×3 0.1 ml×3 |
1 3 1 0 43
2 3 2 0 93
3 3 1 1 75
4 3 2 0 93
5 3 2 2 210
6 3 1 0 43
7 3 2 0 93
8 3 2 1 150
9 3 1 0 43
10 3 2 0 93
∑ 936 |
表2 样品10次检测的大肠菌群含量对数的均值和标准差计算
| 编号 检测结果 lgAi lgAi- lgA (lgAi- lgA) |
1 430 2.633 -0.281 0.078961
2 930 2.968 0.054 0.002916
3 750 2.875 -0.039 0.001521
4 930 2.968 0.054 0.002916
5 2100 3.322 0.408 0.166464
6 430 2.633 -0.281 0.078961
7 930 2.968 0.054 0.002961
8 1500 3.176 0.262 0.068644
9 430 2.633 -0.281 0.078961
10 930 2.968 0.054 0.002916
∑ 9360 29.144 0.485176 |
标准不确定度为
相对标准不确定度为
5 合成不确定度
根据JJF1059－1999《测量不确定度评定与表示》要求列出各不确定度分量列表3。
表3 不确定度分量列表
| 来源 评定方法 分布 包含因子 量值 UC（X） UCREL（X） |
取样体积（V1） B类 均匀 25 0.05856 0.002342
稀释后的体积（V1+V2） B类 均匀 250 1.150 0.004600
检测重复性 A类 2.914 0.07342 0.02520 |
相对合成标准不确定度为
合成标准不确定度为
6 结果报告
该样品中的大肠菌群含量为A＝102.914＝820MPN/100 ml。
取置信水平P＝95%，自由度r=9,查t分布表得：t95(9)=2.26=k。
对数均值的扩展不确定度为：U=2.26R 0.07495=0.1694。
检测结果的对数均值的范围为2.914±0.1694，取反对数后，样品中大肠菌群含量的取值范围为560～1200MPN/100 ml。
7 讨论
通过本次大肠菌群不确定度的评定可知，B类不确定度对大肠菌群检测的合成不确定度贡献较少，是重复检测所引起的不确定度的1/5。以大肠菌群的分布不均匀和重复检测所引起的不确定度为主。根据CNAS-GL05：2006《测量不确定度要求的实施指南》，对那些比最大分量的三分之一还小的分量不必仔细评估，以后对大肠菌群不确定度的评定时，B类不确定度可以忽略不计。
由于大肠菌群的生长模型是几何级数生长，所测结果的发散性较大，因此采用对数统计比较合理。
应助达人
迎国庆送壕礼！十月发帖抢大疆云台
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
喜迎国庆！第十七届原创大赛超级原创日参赛奖励翻倍
丹纳赫四十周年寄语征集领大礼包
