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安谱SPE小柱使用体验原创征文-安谱Poly-Sery HLB 与传统C18小柱对卡马西平和咖啡因的回收率比较

诺诺哒

2015/09/30

私聊

液质联用（LCMS）

安谱SPE小柱使用体验原创征文表格

安谱Poly-Sery HLB 与传统C18小柱对卡马西平和咖啡因的回收率比较

实验目的（实验背景及目的）：
药物是一种可以影响人体生理过程、生化过程以及病理过程的一些物质，它在人类生活中必不可少，给人类带来了很多益处，用来预防疾病、诊断疾病、治疗疾病。但在给人们带来益处的同时也伴随着水环境风险和生态安全问题，随着药物的大量使用、人与动物的排泄、污水厂对药物处理的局限性，使得药物不断进入城市河流及海洋湖泊中。药物在水环境中的的含量比较低，一般为ng/L~ug/L水平，低于仪器分析要求的检出限，同时由于水中的污染物成份复杂，从样品中分离纯化、富集目标物就显得尤为关键。而检测SPE小柱的性能可通过回收率体现出来。
实验方法（前处理，标准品配置，色谱条件等）：
标准品配制：
标准储备液的配制：配制1 mg/mL的标准物质溶液于试剂瓶中，放于4℃冰箱储存，都用甲醇溶解。
工作液：用甲醇配制单个标准品所需浓度进行化合物优化。用储备液配制所需浓度混合标准溶液。储存方式都为4℃冰箱。
预处理方法：
见图片
色谱条件：流动相为B相甲醇和C相0.1%（v：v）的甲酸水溶液。为有效地分离目标物并得到较好峰型，做了多种梯度淋洗程序的对比，最终采用11 min的梯度淋洗程序。柱温30℃，进样量10 μL，流速0.2 mL/min。

SPE小柱信息1：

货号	SBAA- 或SBEQ-CA3185
描述	Poly-Sery HLB为水浸润型聚合物SPE固相萃取小柱。Poly-Sery HLB吸附剂的技术参数为平均粒径：60 μm，平均孔径：180 A，比表面积：710 m²/g
规格	200 mg，6 mL/30 pcs

SPE小柱信息2：

货号	其他品牌1
描述
规格

SPE小柱信息3：

货号	其他品牌2
描述
规格

目标化合物	咖啡因（Caffeine）和卡马西平(Carbamazepine)
样品基质	河水
样品基质中主要干扰物及其他成分	河水中的其他与两个目标物结构相似的药品以及河水中的污染物质及金属离子等
分析方法（参考标准）	SPE+UHPLC-HESI/MS/MS
具体操作步骤		溶剂		体积mL	流速	备注
	活化	甲醇		5×3	5 mL/min
	平衡	超纯水		5×3	5 mL/min
	上样	水样		500	10 mL/min
	淋洗	超纯水		5×3	5 mL/min
	洗脱	甲醇：二氯甲烷：丙酮（40:40:20）		3×2	2 mL/min
	之后	氮吹至近干，定容到1 mL,加入内标物
	其它	进样前样品需经过0.22 um的针式过滤头过滤
检测仪器（GC/GC-MS/HPLC/LC-MS）	HPLC/LC-MS
色谱条件	色谱柱：Hypersil GOLD-C18色谱柱
其它	GC（升温程序，载气等）/LC(柱温，流动相条件等)		柱温为30℃，流动相为B相甲醇和C相0.1%（v：v）的甲酸水溶液
	检测器（条件）		喷雾电压:3 200V；蒸汽压温度:300℃；鞘气压:30 arb；辅气压:5 arb；毛细管温度:300℃。
	进样量		10 uL
	其它

实验过程照片：
见图片
实验谱图
见图片

实验数据
检测对象为河水，所以采用河水加入药品标准品确定目标物在该基质的回收率。在500mL水中分别加入50 ng、200 ng及500 ng的混合标准溶液，进行三个浓度水平的加标回收率实验。每个水平做三个平行样。两种目标物的加标回收率见表1：

表1 目标物的加标回收率

分析物		50 ng		200 ng		500 ng
分析物		% 回收率	RSD	% 回收率	RSD	% 回收率	RSD
CNW-HLB	咖啡因	100.7±8.8	3.2	116.1±2.1	1.6	111.0±10.6	9.5
CNW-HLB	卡马西平	91.5±3.3	3.6	84.0±1.0	1.1	80.9±10.7	13.2
C18	咖啡因	74.2±7.6	10.3	86.1±3.1	4.8	81.0±8.7	10.4
C18	卡马西平	65.6±4.2	7.6	74.0±4.6	7.3	78.6±11.3	14.8

结果分析及讨论（色谱图，标准曲线，空白基质，加标浓度，回收率等）
讨论实验内容及对安谱SPE小柱的评价
目标物的定量采用内标法。准确移取适量混合标准液，用甲醇-水（1:4）配制成9个不同质量浓度的标准工作溶液(0.01、0.1、1.0、5.0、10、50、100、500、1000 μg/L)，混标中加入40 ng 内标物后进行分析。标准曲线横坐标为目标物浓度，纵坐标为目标物与内标物峰面积之比，权重采用1/x²。线性相关系数都大于0.99。
从表1可以看出，使用安谱SPE小柱两种物质的平均回收率均超过80%，RSD不大于15%。而传统硅胶基质SPE小柱（C18）两种物质的回收率明显低于安谱SPE小柱。这是因为上海安谱公司的（CNW）Poly-Sery HLB为水浸润型聚合物SPE固相萃取小柱。这种亲水-亲脂平衡的HLB吸附剂，非常适合于含水样品中极性与非极性有机化合物的同时提取。它作为酸性、中性、碱性化合物最通用、最广泛的吸附剂，其基质是改性的二乙烯苯聚合物，是满足所有SPE要求的亲水-亲脂平衡HLB反相吸附剂。与传统的硅胶基质的小柱不同，HLB聚合物表面有亲水性和疏水性基团，具有良好的水浸润型，并且在pH1-14的范围内都非常稳定.因此,它显示出对多种不同分析物保留的特性，特别对极性化合物，相对保留容量较传统硅胶基质SPE（如C18）高三倍以上。