关于凝胶色谱（GPC）在HPLC仪器上应用的方法可行性讨论

凝胶色谱原理其实和LC类似，用来测定其分子量，只是其分离原理和一般的LC不太一样；由于凝胶色谱的色谱柱不是常规C18柱，填料是树脂或者凝胶，其分离原理：与色谱柱填料孔径和样品分子大小相关，根据样品的分子大小进行分离，因此，大粒径的分子先出峰，小粒径的分子后出峰。
一般凝胶色谱的检测器是示差折光检测器，色谱图横坐标是出峰时间，众坐标是样品响应强度（与样品浓度/含量有关）；一般凝胶渗透色谱能分离的物质的分子量从500-几百万，但是具体要根基色谱柱的分离能力来定，另外，凝胶色谱只是对样品进行粗分，最终得到的也是相对分子量（与用标样建立的曲线得出），若是相差几百的分子量一般分不开。
凝胶色谱的标准曲线是出峰时间与分子量建立的曲线，由样品的出峰时间确定其分子量，其分子量与实际的分子量是有偏差的，只能用做参考；因为标样的结构与样品结构存在一定偏差，最终得到的分子量也是相对的。

应助达人

1，凝胶色谱是一个配备有特殊检测器和别的装置的大型仪器吗？还是只是色谱柱是凝胶色谱柱？如果将HPLC（MS）的色谱柱更换为凝胶色谱柱，是不是就达到了凝胶分离的效果，操作上可不可行？
答：理论上如果聚合物仍有稳定性紫外吸收可以试行凝胶分离+紫外检测，如果紫外吸收不好，考虑凝胶分离+示差折光检测器或蒸发光散射检测器。

2，因为聚合色素的结构复杂，同分异构体也会很多，我自认将其每个分离纯化出来都是不可能的工作。而且，因为凝胶色谱的分离只能达到将不同水力半径的物质分离的目的所以，其最终的分离效果如何仍然未知，望有经验的朋友指点一二，不胜感激！
答：要分离异构体确实比较困难，使用手性色谱柱可以分离部分手性异构体，另外成分如果复杂不要考虑一个过程检测出全部成分，可以考虑针对不同成分采取不同的检测方法，引入气相、MS等。

3，我认为，聚合色素分离的关键在于色谱柱，只有符合聚合色素物理化学特性的色谱柱才能解决分析检测的能力。
答：任何分离的核心都是色谱柱，其它流动相、温度等都是辅助。

非常感谢您这么详细的解答。聚合色素这十几年来在检测领域就没有得到好的分离，所以这也是一个非常艰巨的任务，也非常有意义。
我现在最担心的问题是1：凝胶色谱的分离效果，您也提到了分子量差异几百的可能效果不好，而聚合色素的单体差不多都是300-400，可能对聚合度差几个的分离度不好。但如果以聚合度分组如聚合度n=5,n=10,n=15.....的色素来说，他们每组的分子量之间差了大概1500-2000，依照您的经验，是否有可能得到好的分离呢？
2：在我们实验室是LC是连接有MS的（离子阱，三重串联四级杆），对于确定分子量和结构可能还是相对容易点的。