求大神赐下安捷伦7890/5975面积归一化法操作流程

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版面内有帖子介绍，搜起

半定量法如何操作？

谢谢

应助达人

半定量法是需要加入内标物的，然后利用内标物和目标物的响应比例来半定量。

应助达人

半定量指南
概览
半定量方法在最初在仪器上校正的定量数据库中（而不是在其所驻留的数据库中）包含一个或多个化合物。这些化合物定义为半定量化合物并要求其校正曲线相近似。

此指南中创建的“半定量”方法仅供指导使用，不能用于仪器的实质性分析。

创建“半定量”方法，需要：

? 调用和解析在其他仪器上创建的方法

? 运行校正并重新锁定样品

? 重新锁定方法

? 将化合物转换为半定量化合物

? 更新新仪器的校正响应

在开始操作之前，您需要创建包含定量数据库的方法。该数据库应能够识别联苯、氯联苯和十六酸甲酯并对其进行定量分析。创建定量方法文件时如果需要帮助，请参考指南 - 使用自动定量设。使用 DEFAULT.M 和 EVALDEMO.D 创建定量方法之前，请将这两个文件复制一份，并将文件另存为 sq_meth.M 和 sq_resolved.D。

半定量指南使用在上一步骤中在 DEMO 目录创建的位于 DEMO 目录中的 sq_meth.M 和 sq_resolved.D 文件。

调用和解析方法
“半定量”方法需要运行在硬件相似的仪器上。进样口、色谱柱和质谱图硬件必须相同。使用自动进样系统效果最佳。进样针大小、进样量和进样口衬管也必须相同。由于“保留时间锁定”方法可以在进行定性分析的仪器之间不断移植，因此，这是“半定量”方法的最佳描述点。

1. 在“仪器控制”视图中选择“方法\调用方法…”，然后从“演示”目录中选择 sq_tutorial.M 方法。

2. 出现提示后，单击“解析方法”按钮并按照屏幕指示操作。

3. 选择“方法\方法另存为...”，然后输入 sq_resolved.M 作为方法名称。

4. 出现“将方法另存为重新锁定？”时选择“是”。

运行校正并重新锁定样品
在示例方法中，保留时间会锁定在用于方法内标的相同化合物上。我们准备的要在本主题中运行的样品中的数据文件在“重新锁定方法”和“更新对新仪器的响应”主题中都会用到。

通过使用本指南的“重新锁定方法”主题中提供的样品数据文件，可以跳过以下有关样品准备和数据采集的步骤。

1. 准备一个浓度为 50 ppm 的 abc 溶液的 xyz 化合物样品。

2. 将样品瓶装入自动进样器中。

3. 当“启动”图标上的箭头显示为绿色时，选择该图标，然后在“采集 - 样品信息”对话框中输入以下信息：

- 数据文件名称 sq_resolved.d

- 适用于硬件的样品瓶号

- 已经过检查的数据采集，尚未经过检查的数据分析

- 进样量 XX。

4. 在“采集 - 样品信息”对话框中单击“开始运行”按钮，然后等待运行完成。

5. 选择“视图\数据分析”进入“数据分析”视图。

重新锁定方法
在示例中，仪器的进样口类型、色谱柱类型和长度以及 MSD 进样口压力都不相同，而且我们还有可能重新锁定方法。压力校正曲线的各个进样口压力设定值的可用范围为 20%。如果此方法不能重新锁定新仪器，必须为“半定量”方法创建新的压力校正曲线，本指南中没有这方面的介绍。

1. 在“数据分析”视图中选择“方法/调用方法…”，然后选择 sq_resolved.M 以调用新解析的方法。

2. 选择“文件\调用数据文件…”，然后选择新采集的数据文件 sq_resolved.d，也可选择“演示”目录中的样品文件 sq_resolved.d。

3. 选择“视图\保留时间锁定设置”访问“保留时间锁定设置”视图。

4. 选择“保留时间锁定\报告保留时间锁定校正”并打印报告。

5. 根据“保留时间锁定校正”报告中的锁定保留时间检查 sq_resolved.d 数据文件中锁定化合物的保留时间。如果化合物在正确的保留时间洗脱，则无需进一步操作，可以直接跳转到步骤 11。

6. 从“数据分析”中选择“保留时间锁定设置”。

7. 选择“保留时间锁定\保留时间锁定方法”。

8. 出现提示时，选择 sq_resolved.d 数据文件。

9. 出现提示时，选择锁定的化合物峰。系统将计算用于方法的建议压力。

10. 出现使用新压力更新方法的提示时选择“是”。

11. 选择“保留时间锁定\报告保留时间锁定校正”并打印显示新的锁定保留时间的报告。

12. 选择“视图\返回到数据分析”进入“数据分析”视图。

将化合物转换为半定量化合物
要完成这部分操作，首先要将“目标”化合物的类型从“定量”转换为“半定量”，然后检查多个化合物的“定量”类型数据库条目以查看结果。

开始此转换过程时，将从前面介绍的“重新锁定方法”主题调用 sq_resolved.M 方法文件。

1. 选择“将目标化合物校正\转换为半定量化合物”。此操作会将定量数据库中的所有目标化合物的类型从“定量”转换为“半定量”。

2. 选择“校正\编辑化合物”，然后从“编辑化合物”对话框中选择第一个非内标化合物。

3. 显示的“编辑化合物”对话框将“定量”类型显示为“半定量”化合物。浏览以观察全部被转换的化合物。

4. 在“编辑化合物”对话框中单击“确定”按钮。

更新对新仪器的响应
系统将使用内标响应更新定量数据库中所有半定量化合物类型的响应。系统通过计算在初始校正仪器上运行的内标响应与在此仪器上运行的校正过的内标响应的比值进行更新。然后用该比值作为因子乘以每个“半定量”化合物的响应。

开始此过程时，将从前面介绍的“重新锁定方法”主题调用 sq_resolved.M 方法文件和 sq_esolved.d 数据文件。

1. 选择“校正\列表…”，然后从“选择方法报告”对话框中选择“校正报告”，再单击“确定”。该报告会显示在更新“半定量”化合物相对于运行在校正仪器和本仪器上的内标的响应之前使用的校正曲线算法。

2. 选择“校正\更新…”，然后从“更新选项”对话框中选择“更新一个级别”，再单击“确定”显示“更新校正”对话框。

3. 选择“更新级别”，并选中“响应”和“替换”复选框。

4. 从“现有级别 ID”选择 xx。

5. 单击“执行更新”按钮。

6. 选择“方法\方法另存为...”，然后输入 semi_quant.M 作为方法名称。

7. 选择“校正\列表…”，然后从“方法报告”选择对话框中选择“校正报告”，再单击“确定”。将新算法与更新内标响应前使用的算法进行比较。保存此报告以供日后出现问题时使用，该报告还可用于在更新内标响应时进行的比较操作。

现在只可以在本仪器上使用新的半定量方法。

应助达人

半定量化合物响应的系统计算
给定浓度的相对响应因子 (RRF) 必须与校正化合物的仪器上的相对响应因子相同，并且该仪器包含参考该相对响应因子的半定量方法。

(Rc/Ri) 校正的 = (Rc/Ri) 半定量

其中，Rc 是化合物的响应，Ri 是相同浓度下的内标响应。

相对响应因子用于调整计算半定量化合物的校正曲线。半定量仪器上校正的 ISTD 响应乘以相对响应因子得出在相应浓度上的半定量化合物响应值。

(Rc) 半定量 = (Ri) 半定量 * (Rc/Ri) 校正的

其中，Rc 是化合物的响应，Ri 是相同浓度下的内标响应。

应助达人

半定量方法
不可以在运行方法所在的仪器上校正半定量化合物。半定量化合物要求其校正曲线相近似。包含半定量化合物的方法被定义为半定量方法。

半定量化合物是不同于目标、内标、基质加标化合物的另一种 MSD ChemStation 化合物。 半定量化合物不能提供已校正化合物所能达到的量化精度，但可以为实验室提供其所需的尽可能接近的类型报告结果。在可找到半定量化合物的数据上运行时，MSD ChemStation 定量报告会在报告后面将这些半定量化合物报告为一组化合物。该报告可确保结果准确无误。

可以在以下情况中使用半定量方法：校正标样运行在一台仪器上，然后在另一台同样的仪器上将该方法复制并用作半定量方法。由于相同条件下化合物的保留时间随运行样品的仪器的不同而不同，因此必须采用“锁定保留时间”方法。每台仪器使用的调谐越接近，生成的半定量校正曲线就越精确。当两个方法均采用“目标”调谐时所获得的效果最佳。

可通过以下两种方式创建半定量方法。可以将在其他仪器上使用的整个方法转换为半定量方法，也可以在任何现有的量化方法中添加半定量化合物使其成为半定量方法。

应助达人

将基于内标的相对因子应用于半定量化合物
半定量方法中的内标必须使用此方法在仪器上进行校正。内标响应可能已存在于定量数据库中。如果定量数据库中没有内标，则进行校正并将内标添加到正确的浓度级别。

检查原始校正方法的定量数据库。在编辑化合物面板的校准选项卡中，记录相应化合物的响应及其所有浓度下的内标。

使用第 1 项中记录的响应，计算相对响应因子。

通过将半定量化合物直接插到其新内标下，将半定量化合物添加到定量数据库中。添加化合物最简单的方法是复制校正的化合物数据文件（任意浓度），然后使用“自动定量”进行添加。如果数据文件不可用，则复制校正的化合物（编辑化合物）的第 1、2、3 页，然后将其转移到半定量化合物的第 1、2、3 页。在编辑化合物面板的校准选项卡中填入浓度。不管使用什么方法，都必须删除响应或将其保留为空白。

在编辑化合物面板的识别选项卡中，将化合物类型更改为 SemiQuant。

选择为新的半定量化合物校正\创建响应...，然后在系统提示时输入相对响应因子。系统将计算半定量化合物响应并为化合物创建新的校正曲线。

打印校正报告以供日后参考。检查曲线系数，并确保日后出现问题时这些系数在此报告中不会发生更改。