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xbrige c18 长期做碱性改成酸性后，空白出了很多包和杂质，求教

cafecat

2016/02/24

液相色谱（LC）

现在使用的柱子是waters xbrige c18，使用的仪器是安捷伦1100。
这根柱子原来一直是做碱性流动相的，一般是10MM碳酸氢胺水和乙腈梯度洗脱，今天我用它来做酸性流动相，用的是 0.05％tfa的水和 0.05％tfa的乙腈，洗脱条件是0-12分钟，水从95％到5％，12-15分钟保持95%不变，有5分钟的平衡时间。
现在的现象是，进空白的时候，从10分钟以后就不停的鼓包和出峰，这些峰在214NM的吸收大概250，230NM大概150，254NM大概25。现在我基本上已经排除了仪器的问题，换了一根同样的柱子也是同样的问题（这个色谱柱以前也一直是做碱性条件的）。
现在的问题是，为什么会出现这样的问题那？是不是我经常做碱性条件导致了色谱柱内的物质残留，然后今天做酸性条件把杂质重冲出来了？还是由于柱子使用时间久了（3年，非天天使用），里面的物质会随着流动相跑出来被紫外检测到了？
这个论坛里大神比较多，是否有哪位大神能帮我一下

分
该帖子已被版主-一片枫叶加5积分，加2经验;加分理由:问题讨论

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一片枫叶

第1楼2016/02/24

应助达人

在碱性流动相介质中具有强保留的组分，在酸性介质中被强烈离子化而被高洗脱浓度的酸性乙腈洗脱出峰，在低波长这些具有紫外吸收的被洗脱的成分表现更明显，因而出现了楼主所描述的现象。

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cafecat

第2楼2016/02/24

谢谢版主大人，我还想知道是否还会有其他原因会导致这样的结果？那我想在现有的条件下能够顺利的完成分析条件，需要做哪些工作？
一片枫叶(v2960432) 发表:在碱性流动相介质中具有强保留的组分，在酸性介质中被强烈离子化而被高洗脱浓度的酸性乙腈洗脱出峰，在低波长这些具有紫外吸收的被洗脱的成分表现更明显，因而出现了楼主所描述的现象。

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夏天的雪

第3楼2016/02/25

应助达人

之前用碱性流动相时做完样品不冲柱子的吗？

1

cafecat

第4楼2016/02/25

冲洗的啊，一般我们的条件是 0-30分钟 100%水 30-70分钟 100%水-0%水 70-100分钟 0%水 1ml/min流速
但是柱子时间已经比较久了估计有3年左右使用时间了
夏天的雪(bingwang228) 发表:之前用碱性流动相时做完样品不冲柱子的吗？

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夏天的雪

第5楼2016/02/25

应助达人

先用两通走基线看是否会有杂质峰，然后再排除色谱柱
cafecat(v3070956) 发表: 冲洗的啊，一般我们的条件是 0-30分钟 100%水 30-70分钟 100%水-0%水 70-100分钟 0%水 1ml/min流速
但是柱子时间已经比较久了估计有3年左右使用时间了

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cafecat

第6楼2016/02/25

已经走过了，没有什么问题的
夏天的雪(bingwang228) 发表: 先用两通走基线看是否会有杂质峰，然后再排除色谱柱

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夏天的雪

第7楼2016/02/26

应助达人

那就是色谱柱的问题了，用有机相多冲洗一段时间，如果是填料损坏估计就很难办了
cafecat(v3070956) 发表: 已经走过了，没有什么问题的

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有水有渝

第8楼2016/02/26

应助达人

应该是碱性条件下的污染性强保留物质在酸性条件下被洗脱。另一个就是梯度变化的幅度不小，建议不进样走一下梯度看看结果。

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lsc362276

第9楼2016/04/17

学习了谢谢

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seannoy

第10楼2016/04/18

又看到了100%水洗柱子....

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