【参数解读总结篇】超高效液相色谱仪器性能和技术参数解读

老多_小多

2013/09/15

私聊

液相色谱（LC）

【参数解读】超高效液相色谱仪器性能和技术参数解读
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130803/4888003/

超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC）是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC（高效液相色法）的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域，作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱系统在1996年问世，之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前，超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。

如图：HPLC与UPLC分离比较

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请您来解析：

1、一套真正的UPLC哪些技术参数是支撑？有哪些是其标志性参数？
UHPLC的标志性特点就是压强高，进样量少，死体积小，流速慢，出峰快。耐压是首要的，然后就是色谱柱了，其次就是仪器系统的整体设计。对UHPLC来说，重点还是流量的精准和耐压吧，还有就是延迟体积小，响应时间要够快。

2、耐高压系统评价：要求能耐多少压力以上才算UPLC，真的是超过15,000psi才算吗？
有版友觉得能满足要求就好。一般12000psi可以耐受大部分的试验条件，如果色谱条件更改导致压力再提升，色谱柱的寿命可能会受影响，可能得不偿失。对于绝大多数要进行成本核算的使用者来说。

3、泵系统控制精确的流速，相对标准偏差要求在多少之内才算稳定？梯度延迟时间等？
有多少个方法的流速是需要设置到小数点后第三位的？绝大多数方法的流速是1.0ml/min或者0.8ml/min之类的设置，小数点后两位的精度足够我们用了。目前大多数色谱软件识别色谱峰的保留时间窗都是5%。记得我曾看过一家外企药厂的内控标准，好像样品保留时间与标准品的偏差小于1%即可。延迟体积，对于新开发的方法或者方法传递的要求而言，是越小越好。目前各厂家好像都能控制在500ul以下，甚至于100ul以下。

4、小内径小填料色谱柱，用什么规格的最合适？
根据检测的样品来定

5、高灵敏小检测池的检测器，检测器的耐压，都与普通LC检测器有哪些区别？
耐压更高，灵敏度要高几倍。DAD检测器也很有门道，要达到更高的灵敏度和信噪比，目前的潮流是全反射光纤流通池。貌似Agilent的是 TeflonAF管的材质（比金子都贵的材料呀），也有用石英光纤的。Waters的流通池貌似改过几版，老一些UPLC上的是挂在外面的粗棒子，新的放在机箱内了。

6、超高效液相的仪器性能，你最看重哪些参数，你实际使用的仪器感觉都有哪些性能不足？
稳定性
在流动相必须用缓冲盐的情况下，我更愿意用HPLC。我觉得用UPLC的时候对流动相和样品的前处理要求明显要高很多，不然极易堵柱和系统。对于大多数使用者来说，应该都是希望购买的不是最贵的，而是最合适的仪器。作为一个纯粹的LC的操作者，版友比较偏重的的是系统的重现性、耐用性与灵活性等等。

欢迎大家参与讨论，补充自己想交流的参数，说说自己的认识或者提出自己的疑问！！！

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私聊

老多_小多

第1楼2013/09/15

更详细的解读，大家可以看看这个原创大赛的作品

http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130822/4921792/

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私聊

mksunny

第2楼2013/09/15

应助达人

受教了，但是我记得原来有一次用液相做黄曲霉总量和B1的比对，查的资料说用带荧光检测器的UPLC做黄曲霉，可直接进行，不需要手动柱前衍生或者是柱后衍生和光化学增强器，其原理是因为UPLC的低流动相需求及较大的检测池体积使黄曲霉并没有来及发生荧光猝灭现象就过去了检测器，当时还疑惑了很久，为什么UPLC的检测池体积反而大？