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一片枫叶
第3楼2016/03/02
感谢张老师鼓励!
微聊0303——色谱峰分离与色谱柱压力 来自群友:微聊ABC
微A:如何判断哪个流动相更合适——分别用两种流动相跑同一个样品,跑出来的结果保留时间峰面积都不一样,有没有一个合适的判断标准?
微B:出峰快,分离好,响应高,峰宽小,分离效果好。
微C:分离度≥2.0,拖尾因子:0.95~1.05,这是农业部报证产品分析指标的技术要求。
微A:我想问一下:一般液相和色谱柱的耐压最大能承受多少?
微B:常规液相色谱仪耐压400bar到600bar,正常做液相时,基本上控制在200bar内。常规色谱柱一般都是5um的粒径,柱子压力都在250bar以内。如默克的常规色谱柱耐压:不大于250bar。当然,超高压液相耐压会更高,适用于超高压液相的短柱耐压会更高一些,超高压液相色谱短柱的粒径:在3um以下,还有粒径1.7um的短柱。粒径2.7um的短柱,工作压力450bar左右。
微C:柱子的说明书上一般都有最大承受压力,常规C18,5um,甲醇水不含盐1000psi左右为正常压力。如果要想柱压低,尽量用甲醇。默克的色谱柱耐压:不大于250bar。
微A:压力太大会把柱子冲坏吗?
微B:在色谱柱耐压值以内,柱子是不会冲坏的,柱子怕的是撞击和压力的突然变化,压力太大当然会把柱子冲坏,可以根据情况调整流动相的配比和流速,正常做液相柱压控制在200bar以内。长时间超过200bar柱效会下降。
一片枫叶
第5楼2016/03/04
微聊0304.3——液相跑甲醇水时,基线上下有规则的波动 来自群友:微聊ABC
微A: 液相跑甲醇水时,基线上下有规则的波动,用乙腈水没有问题,改用甲醇水就不行了。
微B:规律特别明显的考虑一下泵是否不稳定,基本无规律考虑一下检测器,压力稳吗?
微A:压力还可以,比较稳定,每个泵单独跑基线就正常,两个泵一起跑甲醇水就不正常,不像检测器的问题。
微B:建议两相用纯有机相冲洗,实在稳定不了,再坼开维护。有时候温度不稳也会出现混合不好的现象,
微B:梯度混合产生气泡不稳定,为了防止检测器进气泡,检测器后加背压,使检测器前后压差相差不多基线更稳定。
下图为两种背压管
背压管与仪器的连接:用氟隆管连接,一端连检测器出口,一端连废液。主要是液相梯度,担心检测器进气泡。
当然,方法有很多,效果能达到就好,你也可以增加废液管的长度或用较细的废液管,但要考虑流通池的耐压。
微C:有一点要注意:不要随意增加或剪短检测器配置的废液特氟隆管的。