牛磺酸用丹磺酰氯做柱前衍生，HPLC出现两个峰

应助达人

是会出两个峰，后面的是。但是楼主的这个出峰时间也太晚了点

应助达人

楼主参考的是哪个标准，以及色谱条件是什么。 (250mm?4.6mm ,5μm)；流动相：乙腈：50mmol/L乙酸钠溶液（乙酸调节pH值为6.0）=30：70，使用前经0.45μm滤膜过滤；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：20uL，这个条件下10min之前就出峰了

请问您用的是荧光检测器还是紫外检测器，如果用荧光检测器，标准品要一起衍生吗？

应助达人

荧光检测器，标准品也要同步衍生

应助达人

差的时间有点远

您好，我按照国标5009.169-2016第二法中的柱前衍生测定牛磺酸含量，在3.9分钟约4分钟的时候出了一个峰，在15min左右和35min左右又出来了两个峰，但是只有4min左右的峰呈线性，后面两个峰均不成线性，所以我选择的牛磺酸的目标峰是4min左右那个峰，但是出峰时间太快了，而且样品中同样方法处理衍生，15min和35min那两个峰就没有了，请问这是什么原因？

应助达人

首先，丹磺酰氯是会出峰的，4min左右出峰应该是丹磺酰氯的峰；配制标准曲线时应该加入不同体积的储备液，然后用相同量的丹磺酰氯进行衍生，不知道您是否如此操作的；您的测试时间是多长，延长测试时间，保证出峰完全，防止在后面的色谱图中出峰。样品中没有后面两个峰，可能是样品中没有牛磺酸，这个可以通过加标进行确认

我做的时候方法是严格按照方法来的，延长了测试时间，能保证出峰完全，按照方法做了线性，准确性、重复性试验、加标回收试验等，都是在4min左右，在目标峰前面一直有一个峰怀疑那个峰是丹黄酰氯的峰

各位大神帮忙看看这个谱图有什么问题？牛磺酸出峰会不会太早了，牛磺酸前面的那个大峰是不是丹黄酰氯的峰，标准品后面为甚还有两个峰？按照3.9min出峰的是牛磺酸来看，做了线性、重复性、准确度、加标回收等试验都表现良好，现在对牛磺酸的出峰时间还是有异议！