梯度洗脱的条件，七种色素目标物分开不了

GB 5009.35-2016合成着色剂

应助达人

分得是哪几种色素，可以分别试试5009.35旧版和新版的流动相

首先，个人觉得国标的仪器分析条件只能参考，实际工作中要以自己仪器分析条件为主。
其次，观察楼主的洗脱条件有两个特点：一是，分析到20分钟结束（楼主列举的两个条件是这样的，可能是为了提高检测速度吧） 。二是，为了能在20分钟结束而强制提高了梯度变化速率，即短时间高浓度跨度。（当然对于某些分析来说是可以短时间陡升浓度的，如目标分析物出峰间隔远，柱中保留过强，后期高浓度有机相冲洗阶段等）。
在次，个人觉得对于多组分的分离，还是要先在等度下洗脱，观察各目标物的出峰时间，当所有目标峰都出现的情况下，观察各峰的分离情况，之后调整流动相配比，进行梯度洗脱。
最后，楼主自己都说了不是前边分不开就是后边分不开，可想而知。
补充，要在满足分离度的条件下，才能尽量缩短检测时间。
以上所说前提条件是，仪器和色谱柱性能正常。

用的就是这个GB

哦哦，一直用的新的，谢谢指点，我试试旧的GB流动相。

哇塞，大神呢，学习了，谢谢

应助达人

两者在梯度上稍微有点不同，您测定时哪7种色素，还有看色谱峰貌似柱效也不太好，也会影响分离的

主要是你的看了梯度太陡了，第一个图10分钟甲醇20到100所以峰1峰2连在一起了。
图一的方法前面插入一段5分钟甲醇5到20试下？
图二来说应该可以继续实验，试下把梯度改为5分钟-10分钟梯度减缓，甲醇20到80，看看峰3是如何变化，或者再延长时间，再做改变。

应助达人

先按标准方法做，保证柱效符合要求，不符合要求的更换色谱柱，在符合要求的前提下，在许可范围内调整色谱条件，使之提高效率，检测首先保证的是准确度，然后才是成本效率。