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合成着色剂的检测之液相色谱条件的优化

浪跡天涯

2017/07/24

液相色谱（LC）

相信大家也会遇到液相色谱峰保留时间偏移的情况，其影响因素很多。下面就日常检测中关于合成着色剂色谱条件优化的经历进行描述，与大家分享一下个人体会和感悟。
一：优化前色谱条件
液相色谱仪：Agilent 1260 Infinity Ⅱ
色谱柱：Agilent EC-C18 4.6*100mm，2.7μm；
检测波长：254nm；590nm（亮蓝）；
柱温：35℃；
流速：0.8mL/min；
流动相：A相：0.02mol/L乙酸铵溶液、B相：甲醇。

时间/min
A相/%
B相/%
0.00
90
10
2.00
90
10
5.00
65
35
11.00
10
90
12.00
10
90
12.01
90
10
15.00
90
10

标准溶液：柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红8种合成着色剂的混标，浓度均为1.0mg/L。
像糕点这样复杂的基质，经前处理后上机，6min之前的目标物（柠檬黄、新红、苋菜红）的保留时间会产生漂移，但梯度变化后的目标物保留时间不变。这样不仅对定性造成一定困难，还使6min之前的极性杂质对目标物造成干扰，如图1。

图1 色谱条件优化前样品中加标质控（上）与标准溶液（下）对比图
注：出峰顺序：柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红

二：优化后色谱条件
色谱柱：Agilent EC-C18 4.6*100mm，2.7μm；
检测波长：254nm；
柱温：35℃；
流速：0.8mL/min；
流动相：A相：0.02mol/L乙酸铵溶液、B相：甲醇。

时间/min
A相/%
B相/%
0.00
95
5
2.00
95
5
8.00
65
35
11.00
10
90
12.00
10
90
12.01
95
5
15.00
95
5

图2 色谱条件优化后样品中加标质控（上）与标准溶液（下）对比图
注：出峰顺序：柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红

首先将初始流动相乙酸铵溶液比例改为95%，然后将梯度变化变缓，使目标物延后出峰，这样既可避开极性杂质的干扰，又可使目标物出峰时间稳定，如图2。这样就解决了上述保留时间偏移及杂质干扰的问题。
另外保留时间偏移产生原因及相应措施有①漏液：检查漏液位置；②流动相比例变化：检查比例阀；③未平衡：空跑流动相至基线平直或直接进样以助于平衡；④流动相pH变化也会引起保留时间变化：重新配置流动相；⑤色谱柱污染：及时冲洗色谱柱，最后用高浓度有机相保存。
保留时间是液相色谱定性的手段，定性之后才能定量。保留时间的稳定性是保证数据准确的前提条件。

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老多_小多

第1楼2017/07/24

优化后峰漂亮了很多

0

浪跡天涯

第2楼2017/07/24

是的，峰变窄了并且对称了
老多_小多(emoc98311) 发表:优化后峰漂亮了很多

0

m3244815

第3楼2017/07/25

基线发生了漂移，是否还可以继续优化？

0

sdlzkw007

第4楼2017/07/26

应助达人

合成色素的国标一直都没有很好的解决问题，感谢分享

1

夏天的雪

第5楼2017/08/03

应助达人

优化后干扰物质的峰不会同步后移吗，保留时间的漂移是方法的问题还是仪器的问题或者样品pH的影响

0

zyl3367898

第6楼2017/08/03

应助达人

最后一段加上结论会不明显些。

0

道兄

第7楼2017/08/04

不知楼主对样品处理方面有没有好的解决办法？如：面包、糕点中的合成着色剂如何提取？

0

夏天的雪

第8楼2017/08/04

应助达人

用水提取，或者氨水提取，然后离心取上清液，最后计算稀释倍数，不知我的方法是否可行
道兄(v3044394) 发表:不知楼主对样品处理方面有没有好的解决办法？如：面包、糕点中的合成着色剂如何提取？

0

m3151364

第9楼2017/08/06

是梯度变化导致的基线漂移，优化前后都存在，只是给出的纵坐标范围不同，范围小的明显些
m3244815(m3244815) 发表:基线发生了漂移，是否还可以继续优化？

0

m3151364

第10楼2017/08/06

1、应该是干扰物质和目标物的极性不同，通过将梯度变化放缓，其保留行为会因此不同。
2、保留时间漂移仪器方面的问题不大，多少会受到样品中基质或pH的影响。
夏天的雪(bingwang228) 发表:优化后干扰物质的峰不会同步后移吗，保留时间的漂移是方法的问题还是仪器的问题或者样品pH的影响

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