1.前言:
辣椒红素是从成熟红辣椒果实中提取的四萜类天然色素,属类胡萝卜素。辣椒红素色泽鲜艳,色价高,着色力强,保色效果好,安全性高,在食品工业应用广泛,可用于水产品、肉类、糕点、色拉、罐头、饮料等各类食品的着色。作为一种天然色素,联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)将辣椒红素列为A类色素,在使用中不加以限量。我国食品卫生法规定辣椒红素可应用于多种食品、医药以及化妆品中。目前测定辣椒红素的方法有薄层色谱法、比色法,也有采用HPLC测定的报道,但仅限于检测辣椒中的辣椒红素,未见有香肠中辣椒红素的检测方法,因此,目前急需一种高效、准确的方法来进行香肠中辣椒红素的检测。
2.分析步骤
2.1储备液的配制
准确称量10.00mg辣椒红素,溶解到丙酮中,定容到10mL,作为1000μg/mL的储备液(实际浓度应乘以辣椒红素的纯度),置于-18℃冷藏保存;
2.2标准中间液的配制
准确量取2mL辣椒红素,溶解到正己烷中,定容到10mL,作为200μg/mL的中间液,置于4℃冷藏保存;
2.3标准工作曲线的配制
用标准中间液配制成1、2、5、10、20、50、100μg/mL的标液作为工作曲线用的标准溶液。
2.4样品处理
精确称取2.00样品于50mL离心管中,15mL的丙酮超声提取30min,离心,上清液转移至100ml梨形瓶中。残渣用15ml丙酮重复提取一次,离心,上清液合并到梨形瓶中。37℃旋干(若最后有水残留,加异丙醇旋干)。用2mL正己烷复溶,过膜,上机。
2.5 HPLC测定
2.5.1仪器条件(Agilent 1260 )
2.5.2色谱参数:
色谱柱:Agilent ZORBAX RX—SIL,5μm,4.6mm *250mm
柱温:30℃
流速:0.8mL/min
进样量:20μL
流动相:正己烷:乙醇=90:10(V/V)
3.结果与分析
3.1保留时间:
20mg/L与50mg/L辣椒红素通过RX—SIL色谱柱分离,确定保留时间,如下图:
3.2检出限
在基质中添加相当于样品含有1.0mg/L的标准品,经前处理上机检测,计算其信噪比(S/N)>10,如图:
3.34.4 线性关系
精密吸取辣椒红素标准品,用正己烷溶稀释成系列浓度为1,2,5,10,20,50,100,200mg/L标准溶液,分别进样测定,以峰面积响应为纵坐标,辣椒红素浓度为横坐标,得到辣椒红素的回归方程为Y=8.05659X-0.09749,相关系数:0.9998,线性关系良好。
4.5 空白样品添加回收:
回收率 |
名称 | 添加浓度 | 回收率% |
火腿肠 | 香肠 |
辣椒红素 | spike-1mg/kg-1 | 88.71 | 91.27 |
spike-1mg/kg-2 | 82.63 | 85.42 |
spike-1mg/kg-3 | 84.25 | 86.33 |
spike-1mg/kg-4 | 95.62 | 95.1 |
spike-1mg/kg-5 | 91.59 | 89.74 |
spike-1mg/kg-6 | 88.48 | 84.55 |
RSD% | 5.36 | 4.57 |
辣椒红素 | spike-20mg/kg | 93.24 | 96.68 |
spike-100mg/kg | 98.44 | 98.69 |
添加回收选取市场上香肠及火腿肠做质控实验,回收均在80%-100%之间,方法稳定性良好。
5.0 结语
初步用正相色谱做脂溶性物质,对此类型化合物较理想,后续继续尝试中。