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【液相色谱之家】各位，我想请问一下，我今天走了个液相样品，采用梯度洗脱，三十分钟内从高有机相到98%的水相，结果46分钟出峰，那是不是我用等度的98%水相跑出峰会更快

元宵爱元宵

2017/08/09

液相色谱（LC）

问题: 各位，我想请问一下，我今天走了个液相样品，采用梯度洗脱，三十分钟内从高有机相到98%的水相，结果46分钟出峰，那是不是我用等度的98%水相跑出峰会更快。因为物质比较纯的，我不知道该高有机相还是该高水相等度走才会走梯度的
回复: 一般会先高水相到高有机相，这样是为了，使后出峰的今早出峰，减少纵向扩散带来的峰展宽增加。
问题: 如果高水相到高有机相走梯度时峰出在高有机相那用高有机相等度走是不是会出峰更快？
回复: 对的，但是你要想，一开始如果是高有机相，会使一些保留弱的东西，非常快出峰，导致分离度不佳，所以才会有梯度这种方法。一般对于反相柱，有个简单的3被规则(其实一般是1.8～2.5倍)，，就是有机相减少10%，相对保留时间增加3倍，这个也是液相方法开发最常用的一个经验规则。
问题: 那我还想问一下，这个只和色谱柱有关吗？不需要考虑样品极性吗？
回复: 这个一般是针对反相色谱柱而言的，，而且在这里提到的是rt相对的变化，，当然，你要说反相柱的保留行为，那肯定是极性小的相对保留性更强啦

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夏天的雪

第1楼2017/08/09

应助达人

个人认为楼主用的是反相色谱，用高有机相时出峰会更快，开始用高水相出峰会更晚

0

vanorazhao

第2楼2017/08/09

用反相色谱走梯度的时候一般从高水相到高有机相的，楼主的出峰时间那么晚，可以计算一下你的出峰时间对应的流动相比例，再以该比例为中间比例进行分离，不用把梯度的范围做的那么宽，浪费时间

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