【我爱创新】+液相色谱-串联质谱法测定保健品中咖啡因的含量

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

乙腈（色谱纯）、甲酸（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、咖啡因标准品（来源：北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司；批号：GBW(E)100174；浓度：0.50mg/ml）。、

2.2 色谱条件

色谱柱：Agilent C18 色谱柱（150 mm×4.6 mm, 2.7μm）；流动相：0.1%甲酸溶液+乙腈=80+20（v/v），等度洗脱；流速：0.4 mL/min ；进样量：5μL。

（1）以电喷雾离子源（ESI）阳离子模式，气帘气 20psi；碰撞气 6psi，喷雾电压 5500V；离子源温度 600℃；雾化气 50psi；时间 6min。

（2）咖啡因质谱参数，见表1。

表1 咖啡因的质谱MRM检测条件

Table 1 Mass spectromwtry MRM monitoring conditions of caffeine

2.4 标准溶液的制备

(1) 标准储备液的配制

分别精密吸取0.50mg/mL咖啡因标准液制成五个对照浓度；分别为0.8μg/mL、1.6μg/mL、2.4μg/mL、3.2μg/mL、4.0μg/mL的工作标准液，经0.45μm的微孔滤膜过滤，进样量为10μL，以浓度C（mg/mL）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准工作曲线。

2.5 样品前处理

取试样20片或10g，研细，混合均匀，精密称取样品约0.1g，置于100ml棕色容量瓶中，加入适量50%甲醇，置40℃超声（功率500W，频率50kHz）处理至提取完全（约15min），冷却至室温，用50%甲醇定容至刻度，摇匀，离心，经0.45μm的滤膜过滤，即得。
3 结果与分析
3.1色谱行为
采用液相色谱串联-质谱法能快速检测保健品中的咖啡因，不会因为其他因素而影响检测。采用01%甲酸溶液和乙腈和按一定的比例等度进行洗脱，6min就能把样品中咖啡因流出，流动相的比例也能让咖啡因不受其他杂质峰的影响，达到准确的分离和定量。见图1和图2。

图1 咖啡因标准品的色谱图

Fig.1caffeine standard of chromatogram map

图2 样品的色谱图

Fig.2 the chromatogram map of the sample

3.2 线性实验

表2 线性实验结果

Table 2 Linear experimental results

表3稳定性实验结果

Table 3 The precision of stability results

表4精密度实验结果

Table 4 The precision of experimental results

表5加标回收率实验结果

Table 5 Standard addition recovery experiment results