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猴头菇饮料对微生物生长的影响

npzyx2014

2017/09/27

食品毒素/微生物检测

猴头菇饮料对微生物生长的影响
猴头菇多糖能改善胃肠道微生物环境，抑制胃肠道致病菌，具有治疗消化性溃疡、慢性胃炎和胃溃疡、十二指肠溃疡等功效，其机理是多糖能对胃粘膜上皮细胞进行再生和修复的功能，提高胃粘膜对有害物质的免疫体系，从而降低粘膜下炎细胞的浸润度。此外，除上述功效外，猴头菇多糖还具有提高生物免疫力、抑制癌细胞的生长繁殖以及抗衰老、抗微波辐射等作用。本章对所制备的猴头菇饮料的抑菌活性以及对有益菌的生长影响进行了研究。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1猴头菇的提取液
用超声提取法（料液比为1：20，浸提时间为20min，浸提温度为50℃）来提取猴头菇粗多糖。
1.1.2菌株
金黄色葡萄球菌ATCC3539，肠炎沙门菌，由*******食品微生物实验室提供；嗜热乳链球菌、保加利亚杆菌：从新鲜酸奶发酵剂（北京川秀科技有限公司）
1.1.3 培养基
(1)保加利亚乳杆菌培养基(MRS)：蛋白胨5.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉3.0g，葡萄糖5.0g，醋酸钠3.0g，氯化钠5.0g，L-盐酸半胱氨酸0.50g，蒸馏水1000mL，用1mol/L的NaOH溶液调节pH至6.8±0.2，121℃高压灭菌30min。
(2)嗜热链球菌培养基（TYC）：胰蛋白胨15.0g，乙酸钠20.0g，蔗糖50.0g，酵母浸粉5.0g，L-盐酸半胱氨酸0.20g，亚硫酸二钠0.10g，氯化钠1.0g，碳酸氢钠2.0g，磷酸氢二钠2.0g，蒸馏水1000mL，用1mol/L的NaOH溶液调节pH至7.3，121℃高压灭菌30min。
(3)金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌培养基（LB肉汤）：蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，葡萄糖1.0g，酵母膏粉5.0g，蒸馏水1000mL，pH至7.0±0.2，121℃高压灭菌30min。
(4)试管斜面培养基：在液体培养基中每1000mL加入20g的琼脂，121℃高压灭菌30min。
1.2 试验方法
1.2.1 保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的分离纯化
保加利亚乳杆菌的分离：将市售的酸奶发酵剂溶于200mL该菌种的基础培养基中，在37 ℃恒温培养箱中培养24h，将待分离的菌液进行连续稀释，然后取0.1mL添加到MRS平板表面，用一次性涂布棒涂抹，于恒温培养箱培养48h后用接种环挑取菌落进行染色观察，确认为保加利亚乳杆菌后，挑取菌落在新的MRS培养基进行划线分离直到获得单菌落，将单菌落接种于保加利亚乳杆菌的基础培养基斜面试管备用。
嗜热链球菌的分离：将市售的酸奶发酵剂溶于200mL的TYC液体中，按照上述培养条件进行培育，将待分离的菌液进行连续稀释，然后取0.1mL添加到TYC固体平板表面，用一次性涂布棒涂抹，于恒温培养箱培养48h后用接种环挑取菌落进行染色观察，确认结果为嗜热链球菌后，挑取菌落在新的TYC培养基进行划线分离直到获得单菌落，将单菌落接种于TYC基础培养基斜面试管备用。
1.2.2 液体菌种的制备
将保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌接种试管斜面上，将传代好的试验菌种放在37 ℃恒温培养箱中培养24h，传代2次作为菌种,接一环于100 mL液体培养基，37 ℃、200 r/min摇床培养24h，菌液为液体菌种
1.2.3 饮料对肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌生长的影响试验
研究饮料对有害和有利微生物生长的影响试验时，用猴头菇提取液进行试验，以便可以用无菌水作为对照，而不需要在对照中加入配制饮料时的其它成份，具体操作如下：
（1）从连续传代培养2次的肠炎沙门氏菌斜面试管菌种中，取一环接种于20 mL液体培养基中，37 ℃恒温箱培养24h，用无菌水进行10位系列稀释至10-7，制备好不同稀释度的菌液。
（2）取7支无菌空试管，分别加入10mL的猴头菇提取液,再分别放入100μL不同稀释度的菌液，以100μL不同稀释度的菌液加入10mL无菌水为对照（CK），置于37 ℃恒温箱中培养24h。
（3）取（2）步骤中处理24h的样品和CK 液0.1mL分别涂于平板上，37 ℃恒温箱中培养24h计数。每个处理重复3皿。
饮料对金黄色葡萄球菌生长的影响试验步骤同肠炎沙门氏菌。
1.2.4 饮料对肠道有益菌生长的影响试验
研究饮料对肠道有益菌嗜热乳链球菌、保加利亚杆菌生长的影响，具体试验操作步骤参照2.3(饮料对肠炎沙门氏菌生长的影响试验)
2 结果与分析
2.1 饮料对金黄色葡萄球菌生长的影响
测定的结果见表4-1，从表4-1中可计算出，CK的菌落为3.3×107，饮料处理的菌落数为5.7×105，因此，饮料中含有的猴头菇提取成份对金黄色葡萄球菌生长的显著的抑制作用。菌落的计数依GB 4789.2-2016中的7.1的计算方法得出。

2.2 饮料对肠炎沙门氏菌生长的影响
测定的结果见表4-2，从表4-2中可计算出，CK的菌落为3.4×108，饮料处理的菌落数为7.2×107，因此，饮料中含有的猴头菇提取成份对肠炎沙门氏菌生长的显著的抑制作用。菌落的计数依GB 4789.2-2016中的7.1的计算方法得出。

2.3 饮料对嗜热乳链球菌生长的影响
测定的结果见表4-3，从表4-3中可计算出，CK的菌落为6.2×107，饮料处理的菌落数为10.2×107，因此，饮料中含有的猴头菇提取成份对有益菌嗜热乳链球菌的生长没有显著的抑制或促进作用。菌落的计数依GB 4789.2-2016中的7.1的计算方法得出。

2.4 饮料对保加利亚杆菌生长的影响
测定的结果见表4-4，从表4-4中可计算出，CK的菌落为9.0×106，饮料处理的菌落数为7.0×107，因此，饮料中含有的猴头菇提取成份对有益保加利亚杆菌的生长没有显著的抑制或促进作用。菌落的计数依GB 4789.2-2016中的7.1的计算方法得出。

从表4-1至表4-4可以看出：猴头菇饮料能抑制有害金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌，对有益菌嗜热乳链球菌、保加利亚杆菌无影响或影响不显著。

3 小结与讨论
3.1 结论
（1）根据浸提猴头菇多糖的优化实验，得出最佳的工艺参数为：浸提时间4h、浸提温度95℃、料液比1：20、浸提次数3次。
（2）应用量值数学法通过对配制好的饮料质量进行感官综合评分，得出500mL原液加入蛋白糖1g、蔗糖2g、柠檬酸0.4g，口味适中，效果最好。
（3）猴头菇饮料采用高温高压杀菌（20min / 105 ℃），经微生物检测，结果为：细菌总数≤100CFU/mL；大肠菌群≤1CFU/mL，符合国家饮料卫生质量标准。该猴头菇饮料能抑制有害金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌，对有益菌嗜热乳链球菌、保加利亚杆菌无影响或影响不显著。

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vm88

第1楼2017/09/27

贴近生活，对这种饮料对菌种的影响进行检测，得出结论。

0

sgxy

第2楼2017/09/27

非常直观明了，学习了

0

我是风儿

第3楼2017/09/28

应助达人

看来猴头菇饮料对微生物还是有一定的作用的

0

mxl2699

第4楼2017/09/29

球菌的图片很清晰，软件上带的吗？

0

wn3367898

第5楼2017/09/30

论文格式很标准，图片也很清晰，便于学习。

0

sgxy

第6楼2017/09/30

就是说，猴头菇能抑制金色葡萄球菌

0

avih1981

第7楼2017/09/30

应助达人

贴近生活的检测，很祥细

0

我是风儿

第8楼2017/10/01

应助达人

看来这种饮料可以多喝些

0

快乐

第9楼2017/10/05

应助达人

是用什么作为提取液？

0

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