水浴浸提猴头菇粗多糖的研究

目前多糖的传统提取方法有水提醇沉、酸液/碱液提取、酶解法等。近年来，微波、超声波,膜处理和CO超临界萃取等方法作为辅助提取或精制，也取得了较好的提取效果。考虑到多糖是一种极性大分子化合物，溶于水而不溶于有机溶剂，本研究采用了不易导致多糖降解的水浴浸提法，并在此基础上辅以微波和超声波两种方式复合提取，不仅操作简便，缩短提取时间，并能有效提高多糖得率。

水浴浸提法

一般植物性多糖的提取多采用热水浸提法，其原理是借助于热力作用使细胞膨胀，发生质壁分离，水渗入细胞壁和细胞质中，溶解液泡中的物质，使其穿过细胞壁，扩散到外部溶剂中。

1 浸提时间对猴头菇多糖提取效果的影响

猴头菇子实体粉碎成过20目筛，称取等量的子实体粉末（2.00克），按重量的20倍加入蒸馏水，分别于90℃水浴中浸提4 h、6 h、8 h，用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液，合并清液并定容至250mL，清液用超纯水再稀释10倍后，取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。

2 浸提温度对猴头菇多糖提取效果的影响

称取等量的子实体粉末（2.00克），按重量的20倍加入蒸馏水，分别于85℃、90℃、95℃水浴中提取4h，用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液，合并清液并定容至250mL，清液用超纯水再稀释10倍后，取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。

3 料液比对猴头菇多糖提取效果的影响

称取同等量的子实体粉末（2.00克），按重量的15倍、20倍、25倍加入蒸馏水，分别于90℃水浴中提取4h，用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液，合并清液并定容至250mL，清液用超纯水再稀释10倍后，取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。

4 浸提次数对猴头菇多糖提取效果的影响

称取同等量的子实体粉末（2.00克）三份，按重量的20倍加入蒸馏水，分别于90℃水浴中提取1、2、3次，用3号玻璃坩埚过滤并洗涤残渣得清液，合并清液并定容至250mL，清液用超纯水再稀释10倍后，取1mL滤液测定多糖浓度,每个处理3个重复。

5 正交试验

为进一步探讨浸提参数中的时间、温度、料液比和浸提次数对子实体多糖的影响。在单因素试验和分析的基础上，进行综合4因素3水平的正交试验。

结果与讨论

1、浸提时间对猴头菇子实体多糖的影响

以过20目筛的猴头菇粉末（下面的试验相同）为实验材料，研究浸提时间对猴头菇多糖浸提效果的影响，在90℃分别浸提4h、6h、8h，实验结果如表2-2。由表2-2可知，猴头菇多糖浸提6h时，多糖浸出量较大；随着浸提时间的延长，多糖浸出量增大不显著，为了节约成本及提高效率，故选择6h作为水浴浸提的最佳条件。

表1 浸提时间对猴头菇粗多糖提取的影响

Table 1 Effects of extracting time on polysaccharide yield

以猴头菇粉末为实验材料，研究浸提温度对猴头菇多糖浸提效果的影响，分别在85℃、90℃、95℃浸提6h，其多糖浸出量如表3所示。由表3可知，在90℃下产量最高，随着温度的升高，多糖浸出量反而减少，差异达到极显著，这可能是由于温度使多糖部分降解的原故。

以猴头菇粉末为实验材料，研究浸提次数对猴头菇多糖浸提效果的影响，分别在90℃水浴锅中浸提1、2、3次，时间为6h,结果见表4。由表4知，在浸提2次下多糖得率最高。

5 单因素最佳条件下水浴提取法的多糖提取率

在单因素的最佳条件下：浸提时间：6h，浸提次数：2次，浸提温度：90℃下进行三次平行验证实验，试验结果（表5）：平均粗多糖的含量为60.0 ug.mL^-1，提取率为7.40%，RSD符合要求。

6 正交试验结果

为进一步探讨工艺参数中的浸提次数（A）、料液比（B）、浸提时间（C）、浸提温度（D）对猴头菇多糖得率的影响。在单因素试验和分析的基础上，其浸提次数（A）、料液比（B）浸提时间（C）、浸提温度（D）4值作为试验水平，以猴头菇粗多糖提取率为评价指标，选用L9（3⁴）正交表安排试验。试验结果如表6所示。

表6 L9（3⁴）正交实验结果及其分析

从本试验的极差分析可知，对猴头菇多糖提取量的影响大小依次为浸提时间、浸提次数及浸提温度，料液比几乎不起影响。由方差分析表可知，相对来说A因素、C因素和D因素为重要因素， B因素为次要因素。从表2-7中可看出对猴头菇子实体总糖热水浸提的最佳工艺条件为：A₃B₂C₃D₃。通过验证实验，三次平行实验得到多糖的提取量为67.2ug.mL^-1，平均多糖提取率为8.40%。未低于实际的多糖提取量7.40%，因此，正交实验法的最佳提取条件为：即在次数为3次，料液比为20：1，浸提时间为8h，浸提温度为95℃。