求生物组织中硫酸新霉素回收率偏低的解决方案！（LC-MS/MS检测方法）

检测方法：UPLC-MS/MS
检测样品：生物组织（肌肉、皮脂、肝脏和肾脏）
提取液：10mM的磷酸二氢钾溶液（1mL）+10%三氯乙酸（含0.4mM的EDTA）（5mL）
上样液：过固相萃取柱的样品溶液

遇到的问题：
1、文献报道这个药物的PKa=8.8，如果在水溶液中要将该药物调成非离子状态，pH该怎么调？
2、用水溶解硫酸新霉素对照品，并稀释成500ppb，过HLB萃取柱，回收率达90%以上；将标准品+提取液混合后，过HLB萃取柱，不调pH时回收率能达90%以上，但按文献报道的调pH6.0~8.0，回收率只有20%左右。将标准品加入至空白组织，混匀后再加相同的提取液，不调pH过HLB萃取柱，回收率在20%多，但上样液调pH至6.0后回收率能达到50%左右。完全相反的两种状态，这是什么原因？
3、将标准品加入至空白组织，混匀后再加提取液，上样液调pH至6.0，过HLB萃取柱，回收率达50%。将空白组织加相同体积的提取液，上样液调pH至6.0，再加标准溶液混合，过HLB萃取柱，回收率只有8%左右。这个结果能说明什么问题？HLB不合适吗？还是上样液的pH调的不合适？
4、将标准品加入至空白组织，混匀后再加提取液，上样液调系列pH（从2.0-10.0），不同pH值的上样液过HLB萃取柱，比较回收率差异，结果显示数值几乎没有变化。上样液的pH值不影响药物在HLB上的回收？
5、大多数文献报道，这个药物用WCX或者MCX萃取柱净化，但实验结果表明，我用的Waters Oasis 的HLB跟MCX的提取回收率几乎一致，都在50%左右。用WCX提取效果更差。
不知道原因何在，请赐教！谢谢！